特殊参考染色法.docVIP

特殊染色法 抗酸杆菌染色 试剂配制： 碱性品红乙醇液：碱性品红5g，无水乙醇100ml 5%苯酚水溶液：苯酚（稍加温使共溶解）5ml，蒸馏水95ml 苯酚碱性品红液：碱性品红乙醇液1ml，5%苯酚水溶液9ml 20%硫酸水溶液：浓硫酸20ml，蒸馏水80ml 汽油松节油液：航空汽油（也可为普通汽油）1份，松节油1份 染色程序： 切片用汽油松节油脱蜡2次，每次5-10min。 不经乙醇洗，只用纱布将切片周围余液擦干。 流水稍洗。 滴入苯酚碱性品红液，于室温下染15—30min。 流水去多余液体。 用20%硫酸水溶液分化至适当为止（一般需1—5min） 流水充分冲洗。 用Mayer苏木精液浅染细胞核。 洗流水冲洗10—15min。 用风扇把切片吹干，随即二甲苯透明，中性树胶封固。 结果：抗酸杆菌（包括麻风杆菌和结核杆菌）呈鲜红色，胞核呈蓝色。 奥新兰过碘酸雪夫代染色 简称（AB—PAS染色） （溶液配制） 1，0.3%的奥辛兰醋酸液：奥新兰0.3g，蒸馏水97ml，冰醋酸3ml 2，1%过碘酸水溶液，schitf代试剂及亚硫酸冲洗液配发同。 （染色方法） 切片按常规脱蜡水洗，再入蒸馏水洗。 染于0.3%或1%奥新兰醋酸液中10—30分钟。 用蒸馏水充分洗，至少洗4次。 1%过碘酸水溶液氧化5—10分钟。 用蒸馏水从分洗，至少3—4次。 Schiff代试剂染10—30分钟。 直接用亚硫酸冲洗3次，每次2分钟。（有固定的作用，把多余的schiff试液洗净） 流动自来水洗5分钟后蒸馏水洗。 苏木素染核。必要时盐酸究竟稍分化后充分用自来水洗。 95% 酒精，无水酒精脱水，二甲苯透明，树胶封固。 （结果） 酸性粘多糖呈靛兰色，中性粘旦白呈鲜紫红色或品红色，中性及酸性粘蛋白混合物呈紫兰色。软骨紫蓝核呈蓝色。 改良Hale胶状铁染色液的配制和应用 （溶液配制）29%氯化铁4.4ml，蒸馏水250ml将蒸馏水置于烧杯内煮沸，然后滴加氯化铁不断搅动直至溶液变成暗红色。停止加热，将冷却后使用。2%亚铁氯化钾水溶液和2%盐酸水溶液各25ml过滤后使用。 注：1%中性品红的配制，中性品红1g用5%硫酸铝溶 1N盐酸75ml （染色步骤） 石蜡切片脱蜡至蒸馏水。 3%新配制好的醋酸水溶液中处理切片5min。 用胶状铁染液染色40—60min 3%醋酸水溶液冲洗3—4次，每次两分钟。 滴入2%亚铁氯化钾盐酸混合溶液处理10min。 蒸馏水洗3—4次。 用1%中性红溶液复染3—5min。 稍水洗。 梯度乙醇脱水，二甲苯透明，中性树胶封固。 网状纤维染色（网织染色） 氢氧化银氨液浸染法（I） 1,实际配制： （1）Gordon—Sweets银氨液：用小量杯盛10%硝酸银水溶液2ml，逐滴加入氢氧化铵，边滴边摇动容器。先出现沉淀物，继续滴入氢氧化按至所形成的沉淀物恰好溶解。加入3%氢氧化钠溶液2ml，在此行程沉淀。继续滴入氢氧化氨，直至沉淀物再次恰好溶解。最后加蒸馏水至40ml，配好后用棕色砂塞瓶盛装，置于4摄氏度冰箱内保存，使用前取出恢复到室温。 （2）酸化高锰酸钾水溶液：高锰酸钾0.5g，蒸馏水100ml 乙液：0.5%硫酸水溶液 硫酸0.5ml，蒸馏水100ml（99.5ml） 甲乙两液分瓶盛装，临用前等份混合。 （3）2%草酸液：草酸2g，蒸馏水100ml （4）2%硫酸铁铵液：硫酸铁铵2g，蒸馏水100ml （5）4%中性甲醛液：甲醛（40%）10ml，蒸馏水90ml。 碳酸钙加至饱和，用时取其上清液。 （6）核固红染液：核固红0.1g。；硫酸铝5g，蒸馏水100ml，麝香草酚50mg。 先把硫酸铝溶于蒸馏水，然后加入核固红，稍加温溶解冷却后过滤，最后加入麝香草酚 2，染色程序： （1）切片脱蜡至水 （2）酸化高锰酸钾液氧化5min （3）稍水洗（4）2%草酸水溶液漂白1—2min（5）稍水洗 （6）2%硫酸铁铵水溶液媒染5min（7）稍水洗，再用蒸馏水洗1次 （8）滴加Gordon—Sweet银氨液，作用1min（9）蒸馏水稍洗 （10）4%中性甲醛液还原1min （11）流水冲洗5—10min（12）以0.2%氯化金调色1—2min （13）蒸馏水洗（14）固定于5%硫代硫酸钠2min （15）用核固红液复染5—10min或行HE复染 （16）稍水洗（17）常规脱水，透明，中性树胶封固。 3，染色结果;网状纤维呈黑色，胞核呈红色（用核固红复染），或蓝色（用苏木素复染），胶原纤维呈黄棕色，细胞质呈淡红色（用伊红复染）。 高碘酸—无色品红（PAS）法 试剂配制 （1）0.5%高碘酸水溶液：高碘酸0.5g，蒸馏水100ml。溶解后，用小口砂塞瓶盛装，置于4摄氏度冰箱保存。使用前取出恢复至室温。 （2）0.5%偏重亚硫酸钠：偏