2017整理实验一-试剂的配制.pptVIP

一、实验目的 通过本实验，掌握常用LB液体/固体培养基和质粒提取试剂的配制方法和技术，为后续实验做准备 二、实验仪器 电子天平 pH酸度计 磁力搅拌器 TOMY SS-325/245自动蒸汽灭菌锅 电子天平 pH酸度计 磁力搅拌器（配搅拌子） TOMY SS-325/245自动蒸汽灭菌锅 检查排放蒸汽的水壶，使腔体内的水位与托板齐平 SET键设置温度和时间（121℃，20min） 关闭排气阀，Start机器开始运行，Check Heat检查设置的温度，Stop键终止机器运行 程序运行结束，旋开排气阀或机器自行排气至压力为0。温度降至80℃以下压力为0时方可开盖。运行过程中勿接触盖子 腔体内经常清洁 LB液体培养基 25ml/2瓶+50mL/3瓶 LB固体培养基（150ml/2瓶）——每150ml液体培养基中加2.25g琼脂 溶液Ⅰ（pH8.0，100ml） 0.4mol/L NaOH（100ml） 2％SDS（100ml） 溶液Ⅲ（pH4.8，100ml） 70％乙醇（100ml） 50×TAE（200ml） 四、试剂灭菌 LB液体/固体培养基 溶液Ⅰ 50×TAE 五、思考题 分子生物学实验中，为什么要对器具和耗材等进行清洗和高温湿热灭菌？如果不灭菌，可能会对实验产生怎样的影响？ 怎样配制LB液体/固体培养基？ 用碱裂解法提取质粒，在配制溶液Ⅰ、溶液Ⅱ、溶液Ⅲ时，为什么要使用