第1节植物组织培养技术分解.ppt

第十八章 细 胞 工 程 目 录 §1 植物组织培养技术 §2 动物细胞培养技术 §3 细胞培养应用——生物制药 §4 动植物新品种创建技术 §5 生物反应器与组织工程 第一节 植物组织培养技术 植物人工繁殖的方法（组培） 一、植物组织培养概述 （一）定义 植物器官、组织、细胞或原生质体等外 植体材料无菌条件下培养在人工培养基上， 在适当条件下诱发长成完整植株的一种技术。 （二）组织培养的分类 据外植体不同:植株培养、器官培养、组织培养（含愈伤组织） 据操作方法不同：固体培养、液体培养（包括振荡培养、旋转培养、静止培养） （三） 植物组织培养条件 1.生物条件 外植体（Explant）主要指用于离体培养的 植物或组织切段。 因素： 不同植物品种 同一品种不同取材部位、发育阶段 一般：生长点、幼嫩组织 （4）其他辅助成分 抗生素：青霉素、链霉素、庆大霉素等，用量在5-20mg／L之间。 抗酚类氧化物：半胱氨酸、Vc，可用50-200mg／L涂于外植体伤口表面。 活性炭，0.5-10g／L，吸附非极性物质和色素等大分子物质。 二、植物组织培养的技术路线 （一）培养材料（全能细胞）采集 ①受精卵 ②分生组织细胞：如分生组织、根尖、嫩茎、 幼叶、花等的细胞。 快速繁殖多用茎尖细胞；无病毒培养多仅取 茎尖分生组织细胞 ③配子和单倍体细胞 （二）培养材料的消毒 材料洗净、沥干、切成小块 70%酒精或３-10％H2O2浸泡30-60s（无菌） 消毒10min（饱和漂白粉液或0.01%HgCl2） 无菌水冲洗干净(3-4次) （三）制备外植体 将消毒材料按培养要求进行处理（无菌） 如：切成0.2-0.5cm厚的小块(片);去 除芽的鳞片、嫩枝的外皮、种皮胚乳等。 但叶片不需剥皮 注意：整个过程无菌操作；严禁用手 触摸材料 （四）接种与培养 接种：外植体植入培养基上（4-10个/瓶） 封口：培养瓶、管等用无菌材料密封 愈伤组织培养：外植体膨大形成愈伤组织 增殖：继代培养与分化培养。 25°C左右培养出新梢，分株或切段 后于增殖培养基上继续培养成芽苗 植物组培流程 无菌操作及操作车间 植物组培室 植物组织培养的应用： （1）试管苗的快速繁殖 （2）无病毒植物的培育 （3）品种选育 （4）人工种子 （5）转基因植物的培育 愈伤组织：是植物细胞脱分化后形成和一种无 定形状态的薄壁细胞。 愈伤组织具有再度分化成其他组织细胞的能力。 铁皮石斛组培苗 炼苗与移栽 炼苗: 不打开瓶口强光炼苗2-3天;开口炼苗1-2天. 移栽： 自来水洗净培养基（防菌），可再用0.1%- 0.3%高锰酸钾或多菌灵浸泡20分钟；苗床上插 孔置苗后加压苗床上基质（置苗前浇透水）， 移到高湿度环境（90%）。 苗 床 三、人工种子（Artificial seed） 所谓人工种子，就是将组织培养产生的 体细胞胚或不定芽包裹在能提供养分的胶囊 里，再在胶囊外包上一层具有保护功能和防 止机械损伤的外膜，造成一种类似于种子的 结构。 人工种子的制作 无菌操作 无菌操作车间 三、植物组织培养再生植株的途径 （一）器官发生途径：成熟细胞→愈伤组织→ 出根出芽→完整植株。 （二）体细胞胚发生途径： 成熟细胞→分生细胞→胚状体→完整植株。 离体的植物器官、组织或细胞 (外植体) 愈伤组织 根 芽 植物体 脱分化 再分化 （一）结构 天然种子的结构： 双子叶植物 单子叶植物 （一）结构 天然种子的结构： （一）结构 从外向里包括三部分： 1.人工种皮外层，保护胚状体中的水分免于丧失和防止外部力量冲击； 2.人工胚乳，含有必需的营养成分和某些植物激素； 3.胚状体或芽。 胚状体 人工种皮 人工胚乳 人工种子 （二）人工种子的优点 1.便于运输和储藏（相对于试管苗）。 2.人工胚乳可根据不同植物的要求配制，通过加入植物激素、有益微生物或抗病、抗虫成分，使人工种子优越于天然种子。 3.可以固定杂种优势，加速良种繁育。 4.可作为植物基因工程和遗传工程的载体。 5.可保存珍贵稀有植物品种。 * *  2.物理条件： 培养环境、组织培养室无菌环境，人工控 制温度、光照、湿度等培养条件。 需要一定的设备、器材和用具。  2.物理条件： 3.化学条件：培养基 （1）无机盐