（脱氧核苷酸）。.ppt

辅酶类核苷酸 辅酶Ⅰ：烟酰胺腺嘌呤二核苷酸，NAD+ 辅酶Ⅱ：烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸，NADP+ 黄素腺嘌呤二核苷酸(FAD) 辅酶A（CoA） NAD+及 FAD是生物氧化体系的重要组成成分，在传递氢原子或电子中有着重要作用。CoA作为有些酶的辅酶成分,参与糖有氧氧化及脂肪酸氧化作用。 The end （五）原核生物DNA的高级结构 （六）DNA在真核生物细胞核内的组装 真核生物染色体由DNA和蛋白质构成，其基本单位是 核小体(nucleosome)。 核小体的组成 DNA：约146bp 组蛋白：H1 H2A，H2B H3 H4 串珠状核小体结构 串珠状核小体 DNA双螺旋片段 染色质纤维 伸展形染色质片段 密集形染色质片段 整个染色体 第三节 核糖核酸 OH OH OH 5′ 3′ RNA和DNA有三点不同之处。 第一，RNA骨架含有核糖而不是2’－脱氧核糖。 第二，DNA中的胸腺嘧啶被RNA中的尿嘧啶取代，尿嘧啶有着和胸腺嘧啶相同的单环结构，但是缺少5’甲基基团。 第三，RNA通常以单链形式存在。 一、tRNA ⑴ 分子量在25kd左右，由73~88个核苷酸组成，沉降系数在4S左右 ⑵ 碱基组成中有较多的稀有碱基 ⑶ 3′末端都为-P-C-C-AOH，用来接受活化的氨基酸 (4) 5′-末端大多为PG-，也有PC-的 。 (5) tRNA的二级结构都呈三叶草形 。三叶草结构由氨基酸臂、二氢尿嘧啶环、反密码子环、 TψC环和额外环。 6.tRNA三级结构的形状象一个倒写的L字母 二、mRNA 1. 原核生物的mRNA是多顺反子，真核生物的mRNA是单顺反子。 顺反子：是决定一条多肽链的完整的功能单位 5′ 3′ 顺反子 顺反子 顺反子 插入顺序 插入顺序 先导区 末端顺序 原核细胞mRNA的结构特点 AAAAAAA-OH 5′ “帽子” PolyA 3′ 顺反子 m7G-5′ppp-N-3 ′ p 2. 大多数真核细胞mRNA在3’-末端有一段多聚腺苷酸（polyA），5，-末端还有一个帽子结构。 三、rRNA 第四节 核酸的理化性质 一、 UV吸收 二、核酸的两性解离性质 三、DNA的变性、复性与分子杂交 一、 UV吸收 DNA的紫外吸收光谱 1.天然DNA 2.变性DNA 3.核苷酸总吸收值 核酸在波长260nm的紫外光下有最大光吸收 1. DNA或RNA的定量 OD260=1.0相当于 50 ?g/ml双链DNA 40 ?g/ml单链DNA（或RNA） 20 ?g/ml寡核苷酸 2.判断核酸样品的纯度 DNA纯品: OD260/OD280 = 1.8 RNA纯品: OD260/OD280 = 2.0 OD260的应用 二、核酸的两性解离性质及等电点 当核酸分子的酸性解离和碱性解离程度相等，所带的正电荷与负电荷相等，即成为两性离子，此时核酸溶液的pH就称为等电点。 核酸溶液在等电点时溶解度最小 核酸电泳 琼脂糖凝胶电泳 三、核酸的变性与复性 变性是指核酸双螺旋区的氢键断裂，变成单链的无规则线团，使核酸的某些理化性质改变，并不涉及共价键的断裂。 核酸变性的因素：加热、极端的pH、有机溶剂、尿素等。 （一）、DNA的变性 DNA变性的过程 DNA变性后的变化：粘度降低，浮力密度升高，失去生物活性，产生增色效应。 增色效应：DNA变性后，隐藏于螺旋内部的碱基暴露出来，使得变性后的DNA对260nm紫外光的吸光率增加的现象。 紫外吸收光谱 1.天然DNA 2.变性DNA 3.核苷酸 完全变性后核酸紫外吸收值： 天然DNA增加25－40%、RNA增加约1.1% DNA热变性时，其紫外吸收值到达总增加值一半时的温度，称为DNA的变性温度，亦称为该DNA的熔点或熔解温度，用Tm表示 。 DNA变性的特点： 变性过程是“跃变式”的 影响Tm值的因素 1.溶液的性质 2.DNA中碱基组成的影响 大肠杆菌DNA在不同浓度KCl溶液下的熔融温度曲线 （二） DNA复性 复性：变性DNA分开的两股链在适当条件下重新生成双链结构的过程 退火（annealing）:热变性的DNA经缓慢冷却复性的过程。 分子杂交 当两条不同来源的DNA（或RNA）链或DNA链与RNA链之间存在互补的碱基序列时，在一定条件下可以通过互相配对形成双螺旋分子，这种分子称为杂交分子。形成杂交分子的过程称为分子杂交（molecular hybridization） 。 核酸探针（nucleic acid probe）:某一具有特定序列并且用同位素或其他化学方法标记的DNA或