超氧化物歧化酶(SOD)的生产---林志豪幻灯片.pptVIP

超氧化物歧化酶（SOD）的生产 生物技术 林志豪 目录 一.SOD的概况 二.SOD的运用 三.SOD的生产 四.SOD使用及生产时的注意事项 五.注意事项 一. SOD的概况 1.超氧化物歧化酶是一种广泛存在于动物、植物、微生物中的金属酶，是生物体内抗氧化酶系中主要成员之一。 SOD是机体内天然存在的超氧自由基清除因子，它通过上述反应可以把有害的超氧自由基转化为过氧化氢。尽管过氧化氢仍是对机体有害的活性氧，但体内 6性极强的过氧化氢酶(CAT)和过氧化物酶(POD)会立即将其分解为完全无害的水。这样，三种酶便组成了一个完整的防氧链条。 2.SOD的分类 按其结合的金属离子可分为Fe-SOD、Mn-SOD、CuZn-SOD三种 3.SOD的理化性质 3.1 SOD对氰化物和H2O2的敏感性 3.2 SOD的吸收光谱特性 3.3 SOD稳定性及影响因素 4.SOD的作用 　 1、抗氧化 　 2、预防慢性病及其并发症 　 3、抗衰老 　 4、抗疲劳 　 5、化疗副作用的消除剂 　 6、避免手术的二次伤害 7、化解妇女的氧化压力危机 　　 二.SOD的运用 1．药物类，主要集中在炎症病患者，尤其治疗类风湿关节炎、慢性多发性关节炎、心肌梗塞、心血管病、肿瘤患者以及放射性治疗炎症病患者； 　　2．用于生化制药，作为一种生化酶制剂，广泛应用于临床和科研上，具有极强的抗衰老，抗肿瘤、 调节人体内分泌系统作用； 　　3．用于化妆品类，可添加在化妆品中，具有抗氧化抗腐蚀的优良性能。以 SOD为主要成份的产品风靡世界，引发了化妆品历史上的一场革命，使人类永葆青春美丽梦想成真； 　　4. 用作保健食品、饮料、如SOD糖、SOD口服液、SOD干啤等都非常畅销! 在饮料、糖果、糕点等食品中加入SOD既可利用其抗腐蚀性延长保质期，又可调节人体内分泌系统。 　SOD被视为生命科技中最具神奇魔力的酶人体内的垃圾清道夫。 SOD是氧自由基的自然天敌，是机体内氧自由基的头号杀手，是生命健康之本。全球118位科学家发表联合声明：自由基是百病之源，SOD是健康之本。体内的SOD活性越高，寿命就越长。 三.SOD的生产 1.SOD酶的提取 称取5克大蒜蒜瓣，加入石英砂研磨破碎细胞 后，加入pH7.8,0.05mol/L的磷酸缓冲液 （pH7.8）15ml，继续研磨20min,使SOD酶充分 溶解到缓冲液中，然后6000r/min冰冻离心 15min，放弃沉淀，取上清液。 2.去除杂蛋白 上清液中加入0.25倍体积的氯仿——乙醇混合液 搅拌15min,6000r/min离心15min，放弃沉淀， 得到的上清液即是粗酶液 3.SOD酶的沉淀分离 粗酶液在搅拌下缓慢加入固体硫酸铵至饱和浓 度60%，持续搅拌15min，6000r/min离心 15min，得到SOD酶沉淀 4. 将沉淀溶入pH7.8，0.05mol/L的磷酸缓冲液 5mL中，然后6000r/min离心15min，放弃沉 淀，取上清液，用凝胶sephacylS-200进行纯 化，然后超滤浓缩。 5. 用紫外分光光度计测定浓液的蛋白含量 6. 将浓缩冷冻干燥后即得成品。 四、超氧化物歧化酶（SOD）的测定 原理 连苯三酚在碱性条件下，能迅速自氧化，释放 出O2-,生成带色的中间产物。在自氧化过程的初 始阶段，黄色中间产物的积累在滞后30-45s后 就与时间呈现性关系。中间产物在325nm处有 强烈的光吸收，在有SOD存在时能催化生成O2 和H2O2，从而阻止了中间产物的积累，通过计 算就可以求出SOD的活力。 仪器 紫外分光光度计、pH计,离心机 试剂 ⑴0.05mol/L连苯三酚溶液：称取3.15g连苯三酚用 0.01mol/L盐酸溶液溶解并定容至500ml ⑵pH=8.3 Tris-HCl缓冲溶液 ①0.1mol/L三羟甲基氨基甲烷（Tris）溶液: NH2C(CH2OH)3 121.1