药品微生物解析.ppt

卫生微生物 药品 （2）特殊规定灭菌药物的无菌检查 1）对象：含有抑菌成分的药物 2）去除抗菌作用：稀释法、微孔滤膜过滤法（孔径0.45um，直径50mm薄膜过滤器）中和法和青霉素酶法 3）对氨基苯甲酸培养基：用于磺胺类药物的无菌检查 卫生微生物 药品 2.无菌试验的结果判定 无菌试验合格判定：阳性对照管应有菌生长，阴性对照管应澄清，所有供试品管均应澄清或者虽然浑浊但证明并非微生物生长所致。 我国药典规定:无菌检查结果不得复试。 如果供试品检出微生物，但有充分证据证明生长着的微生物并非供试品本身所致时，可判试验无效，可重试，否则应判供试品不符合无菌检查法的要求。 卫生微生物 药品 3．无菌检查的局限性与规定灭菌药品的无菌保证 无菌概念是指物品中不含任何活的微生物，然而在实际工作中要达到如此绝对的程度是不可能的。一般以无菌保证水 平(SAL)表示。 对批准灭菌产品采用随机抽样的方法进行抽检，因此，产品的污染率越低，误判合格的概率就越高。 卫生微生物 药品 （二）微生物染菌限度检查法：针对非规定灭菌制剂，不得存在致病微生物 1. 方法 （1）染菌数量的检验 1）菌落总数测定：是指每克、每毫升或每10cm2在需氧条件下，30-35℃培养3d ，在肉汤营养琼脂平板上生长的菌落数（cfu). 2）霉菌和酵母菌数测定：采用玫瑰红钠琼脂或酵母浸出粉胨葡萄糖琼脂为培养基，23～25℃培养5～7d，测定和记录单位同样也是菌落形成单位数． 卫生微生物 药品 3）活菌记数法：平板菌落记数法 细菌： 培养基：营养琼脂培养基 30-35℃、72h 霉菌、酵母菌： 培养基：玫瑰红钠琼脂培养基或酵母浸出粉胨葡萄糖琼脂培养基 20-25℃、5-7天 卫生微生物 药品 （2） 控制菌的检验：非规定灭菌药物中不得检出的菌类称为控制菌 1）我国规定的药品特定菌包括大肠埃希菌、大肠菌群、沙门菌、铜绿假单胞菌、金黄色葡萄球菌、梭菌属和白假丝酵母菌。 2）控制菌的检验步骤：增菌培养，分离培养，生化鉴定、血清学鉴定及革兰染色镜检。同时需用标准菌株作对照试验。 卫生微生物 药品 2．微生物限度检查的结果判定 （1）如果供试品的细菌数、霉菌和酵母菌数以及控制菌三项检测结果符合该品种规定，则判定为供试品符合规定；如果其中任何一项不符合该品种的规定，则判为供试品不符合规定。 （2）控制菌或其他致病菌的检测，按一次检出结果为准，不再复试； 卫生微生物 药品 （3）对于供试品的细菌数、霉菌和酵母菌数，其中任何一项不符合该品种的规定时，应从同一批样品中随机抽样，独立复试两次，以3次结果的平均值报告菌数。 （4）眼用制剂检出霉菌和酵母菌菌落总数时，须以2次复试结果均不得长菌，方可判该项指标合格。 卫生微生物 药品 (三)、细菌内毒素和热原质的检查 1．细菌内毒素和热原质检查的概念与意义 内毒素一个重要的生物学特征是耐热，加热l00℃1h不被灭活，必须160 ℃持续2～4h或用强酸、强碱、强氧化剂煮沸30min才被灭活。 卫生微生物 药品 热原质泛指那些能引起机体发热的物质，可分为外源性和内源性热原质。 外源性热原质为细菌合成代谢所产生的能导致机体发热反应的物质，主要包括革兰阴性菌内毒素和少数革兰阳性菌分泌的外毒素。 内源性热原质则来自机体自身，细菌内毒素可激活机体单核—巨噬细胞和致敏淋巴细胞，使之释放IL-1、TNF-a和IFN-β等内源性热原质。 卫生微生物 药品 热原质检查法也称为家兔热原试验，是将一定剂量的供试品静脉注入家兔体内，在规定时间内观察家兔体温升高的情况，以判定供试品中所含热原质的限度是否符合规定。 细菌内毒素检查法也称为鲎试验，是利用鲎试剂与内毒素产生凝集反应的机制，来判断供试品中细菌内毒素的限量是否符合规定的一种方法。 卫生微生物 药品 2．细菌内毒素和热原质检查的方法 (1)细菌内毒素检查法：鲎试验是一种酶促反应，参与反血的鲎血细胞溶解物的成分是C因子、B因子、G因子、凝固酶原和凝固蛋白原。 卫生微生物 药品 细菌内毒素检查法有凝胶法和光度测定法. 试管凝胶法极为简单，即将鲎试剂与可疑含内毒素的供试品稀释液等体积混合，在37℃水浴中作用l h，然后将试管翻转180o观察结果。如果混合液已形成凝胶并保持在试管底部，即为阳性结果。 卫生微生物 药品 浊度法和显色基质法逐渐发展成熟并被许多国家的药典收载，统称为光度测定法。 浊度法是采用分光光度计检测鲎试剂与内毒素反应过程中浊度的变化从而定量测定内毒素含量的方法。 显色基质法则是利用反应过程中产生的凝固酶水解显色底物所释放出有色基团的多少从