中国农科院基因工程概论历年考博试题集锦.docVIP

中国农科院博士入学基因工程概论试题汇编 2005年 2、噬菌粒的定义和优点 定义：一类由质粒载体和单链噬菌体载体结合而成的新型的载体系列，称为噬菌粒（phagemid或phasmid）。噬菌粒是一类人工构建的含有单链噬菌体包装序列、复制子以及质粒复制子、克隆位点、标记基因的特殊类型的载体。它是包含了丝状噬菌体大间隔区域的质粒，是一种双链质粒，含噬菌体来源的复制子，在细菌的细胞中出现有辅助噬菌体的情况下，可被诱导成单链DNA噬菌粒同时具有噬菌体和质粒的特征，可以像噬菌体或质粒一样复制。它兼具丝状噬菌体与质粒载体的优点。 ：1.双链DNA既稳定又高产，具有常规质粒的特征；2.免除了将外缘DNA片段从质粒亚克隆于噬菌体载体这一繁琐又费时的步骤；3.由于载体足够小，故可得到长达10kb的外源DNA区段的单链。1992年，梁朋和Pardee首次提出差异显示技术(DD-PCR)，并且利用这一技术克隆了几个基因。由于该技术具有快速、灵敏、简单和可分析低丰度mRNA的优点，很快成为克隆新基因和研究植物基因表达的有力工具。这项技术最初用于医学研究上，近年来已开始在高等植物研究中应用，为研究高等植物的发育、生理代谢、基因表达提供了重要的技术手段。是利用一系列的oligo(dT)引物，逆转录真核生物细胞中全部表达的mRNA，通过PCR扩增的方法，转换成cDNA双链，再利用变性聚丙烯酰胺凝胶电泳，将有差异的片段分开，筛选出目的基因。(1)从植物组织中提取总RNA在这个步骤中注意不能有DNA污染，一般用无RNA酶的DNA酶在37下处理30 min(2)在逆转录酶作用下以Oligo T11MN 为引物(M为G、A、C中的任一种，N为A、C、G、T任一种)，进行逆转录(3)PCR反应扩增cDNA的第一条链(4)扩增后cDNA进行聚丙烯酰胺凝胶电泳使差异表达的cDNA片段在6%测序胶上分开(5)找出不同处理间差异显示的条带从胶上切割下来，并回收，再进行第二次扩增(6)克隆差异片段差异片段可作为探针(7)Northern 杂交验证目的片段，去掉假阳性片段(8)对目的片段进行测序(9)以克隆的目的片段为探针从基因组文库中筛选出相应的全长基因。 酵母双杂交系统利用杂交基因通过激活报道基因的表达探测蛋白－蛋白的相互作用。单独的DB虽然能和启动子结合，但是不能激活转录。而不同转录激活因子的DB和AD形成的杂合蛋白仍然具有正常的激活转录的功能。酵母双杂交由Fields在1989年提出. 他的产生是基于对真核细胞转录因子特别是酵母转录因子GAL4性质的研究. GAL4包括两个彼此分离的但功能必需的结构域. 位于N端1-174位氨基酸残基区段的DNA结合域(DNA binding domain，DNA-BD)和位于C端768-881 位氨基酸残基区段的转录激活域(Activation domain,AD).DNA-BD能够识别位于GAL4效应基因(GAL4-responsivegene)的上游激活序列(Upstream activating sequence,UAS),并与之结合. 而AD则是通过与转录机构(transcriptionmachinery)中的其他成分之间的结合作用，以启动UAS下游的基因进行转录. DNA-BD和AD单独分别作用并不能激活转录反应，但是当二者在空间上充分接近时，则呈现完整的GAL4转录因子活性并可激活UAS下游启动子,使启动子下游基因得到转录。 1998年中国农科院博士入学基因工程概论试题 一、什么是基因工程，基因工程在农业生产上有何意义？ 二、简答： 1、聚丙烯酰胺凝胶电泳和琼脂糖凝胶电泳应用有何特点？ 2、举两种植物基因转移的方法?简述其原理。 3、双脱氧法测序的原理 4、转座子标签法克隆植物基因的原理 5、Southern印迹的基本原理，这种方法有何应用？ 6、在DNA复制过程中会形成一种复制体（replisome）的结构，它是由哪几部分组成的？ 7、Sanger测序法的基本原理是什么？ 1999年中国农科院博士入学基因工程概论试题 一．名词解释： 1．CDNA 2 Ti质粒 3. 2u环 4. HAT选择 5 a互补 6 YAC 7 转导 8 基因文库 9 限制性内切酶 10 染色体步查 二．问答题： 1 举例说明两种植物转基因的方法。 2 Phagmid和cosmid作为载体的特点。 3 AFLF原理及其应用。 4 双元载体的概念及构建原理。 5 Southern吸印杂交的原理及应用。 1995年中国农科院博士入学基因工程概论试题同98年 1994年中国农科院博士入学基因工程概论试题 1 AP-PCR和普通PCR的区别。 2 用于植物动物的基因转移方法有何区别。 3 植物基因组和动物基因组结构有何区