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CONFIDENTIAL 免疫学技术和临床 美国贝克曼库尔特公司 免疫产品市场部 洪军 2007.4 安徽 内容摘要 什么是免疫分析的表现 免疫分析的基本概念 如何去设计一个免疫分析试剂 免疫分析对临床意义的改变 Access2 介绍 什么是免疫分析的表现 免疫检测的分析表现 准确性 精密度 灵敏度 特异性 检测线性范围 试剂稳定性 定标周期 开瓶效期 免疫分析检测的临床表现 临床灵敏度和特异性是分析结果准确性的临床表现: 关于分析试剂的检测灵敏度的定义 分析及功能灵敏度 分析灵敏度(Analytical Sensitivity) 使用A点标准品 分析内的测试 最低可辨别0值的功能 分析试剂的理论上的极限 功能灵敏度(Functional Sensitivity) 一系列不同厚度的标准品 分析间的测试,用20%的CV值来分 用来描述分析的临床表现 用人血清分析多于20天,且用多个试剂批号和仪器 分析表现特点: 正常人群参考值和10%CV（功能灵敏度） 免疫分析的基本概念 免疫分析的经典定义 免疫分析（Immunoassay） 是一种技术用于检测和/或定量 免疫学测定的中心问题 作为免疫反应，抗原抗体的选择是整个免疫分析特异性和总体表现的关键 如何选择好一个抗体去检测一个被检物质，而不与非常相似结构的其它物质有交叉反应，或漏掉须反应的物质，这是分析设计的重中之重 抗体的量必须恰当，过多会引起复合物的溶解 关于抗体的亲合力 抗体除了要求纯度外（单价特异性）还必须要求亲合力，效价指抗体的量，亲合力指抗体的质 在非竞争免疫反应的方式中抗体亲和力比标记物的最低检测极限更能影响分析的灵敏度 在竞争法免疫反应的方式中抗体亲和力直接关系到竞争的结果 对于样品中的干扰物质,亲合力影响分析的抗干扰的能力 免疫分析的工作定义 免疫分析(Immunoassay) 是一种测试方式,使用特殊的抗体与被检测物质的结合,此被检测物质不能通过简单的化学方法所容易检测到的. 通常在检测系统中会使用到一种叫标记物（labeling）的物质,常标记在抗体上 通常会有一个分离（separation）的过程在最后读取信号前 总是需要去仔细关注一下分析的方式（format） Access 的技术 免疫分析 - “what＂ 检测技术 化学发光 分离技术 磁性颗粒 分析方式 灵活 检测技术 免疫分析 检测技术(Detection) 有许多可用的方法 应用一些 “标记物＂ 所产生的一些能量进行测定 标记物可以或可以不被激活而产生能量 通过一些相应的检测器对标记物产生的能量进行测定 分离技术 分析方式 放射免疫分析(Radioimmunoassay) 优势 优秀的灵敏度 较宽的检测线性范围 局限性 标记物的半衰期短 试剂效期短 检测结果的重现性差 每次检测都要做标准曲线 分析的反应时间长，半天~2天 发射性污染有害 很难实现自动化检测 荧光 荧光素(Fluorophores) FIA，DELFIA 原理 荧光底物, 4-MUP，或荧光标记物，镧系元素Eu3+,Tb3+,Sm3+ 吸收光为一个短波长的光，而发射光为一个长波长的光 通过荧光计检测 优势 与RIA具有相似的灵敏度和检测线性范围 避免了RIA对危害污染物处理的麻烦和半衰期短的问题 局限性 可能会有来自样品中的一些自身荧光物质或短寿命的荧光物质的干扰 需用空白对照，速率法或推迟读数来克服 酵-颜色的变化 酵(Enzymes) - EIA 原理 在免疫分析结束后通过催化所加入的酵底物 典型的催化反应包括颜色的变化,用分光光度计进行检测 优势 非常容易使用的技术用于一些定性的分析 局限性 对定量分析所要求的灵敏度和宽线性难以实现 ELISA技术必须每次定标 试剂部分成分要复溶重组 反应时间较长 化学发光 化学发光物质 - CLEIA 原理 不稳定的分子通过加入一些化学基团变得很稳定, 而移去这些起稳定作用的化学基团后,分子结构变得不稳定发出光（pH的改变，酵切作用，电激发等） 优势 具备RIA所拥有的优势(灵敏度和宽线性),但排除其缺点 用一个简单的光度计读数 非常低的背景干扰 类型 闪烁(flash), 持续(glow) 发光 发光物质的稳定性 水溶液中的稳定性 化学发光物质 AMPPD, Dioxetane (Lumi-Phos 530TM)-最稳定的化学发光物质（第三代） 第一代：鲁米那 第二代：丫啶酯类，三联 啶钌 代表性分析系统 贝克曼库尔特 - Access/Access 2 /DxI800 终点读数, 更稳定 ACCESS化学发光标记物的特点 很宽的检测线性范围 可检测到6个数量级(例如: 1 - 100,000 units)