实验生物学.docx

共聚焦显微镜定义：是指光路（激发和发射）在两个位置上聚焦。在共聚焦扫描仪中，激发光聚焦在样品点表面，而发射光聚焦在/view/642730.htm针孔上。这一针孔限制仪器在样品表面的聚焦深度，有效防止杂质信号（如灰尘荧光、样品背面的污染、玻璃的荧光信号、空气中常见的灰尘颗粒和来自扫描仪光学组件的荧光污染）产生的背景噪音干扰，从而降低背景信号的强度。优缺点：/subview/901440/901440.htm共聚焦显微镜最基本的优点是可以对厚荧光标本（可以达到 50 micro;m或以上）进行精细的/subview/782116/782116.htm光学切片，切片的厚度约为 0.5到 1.5micro;m。系列光学切片图像可以通过精确的显微镜 Z 轴/subview/1485327/1485327.htm步进马达上下移动标本获得。图像信息的采集被控制在精确的平面内，而不会被位于标本上其他位置发出的信号干扰。在去除背景荧光影响和增加/view/7271.htm信噪比后，共聚焦图像的对比度和分辨率比传统场式照明荧光图像有明显的提高。分类：普通光照激发和激光激发两种原理：激光扫描共聚焦显微镜的主要原理是利用激光扫描束通过光栅针孔形成点光源，在荧光标记标本的/view/605670.htm焦平面上逐点扫描，采集点的光信号通过探测针孔到达/view/485210.htm光电倍增管(PMT)，再经过信号处理，在计算机监视屏上形成图像。对于/view/475448.htm物镜焦平面的焦点处发出的光在针孔处可以得到很好的会聚，可以全部通过针孔被探测器接收。而在焦平面上下位置发出的光在针孔处会产生直径很大的光斑，对比针孔的直径大小，则只有极少部分的光可以透过针孔被探测器接收。而且随着距离物镜焦平面的距离越大，样品所产生的/view/1142133.htm杂散光在/view/642730.htm针孔处的弥散斑就越大，能透过针孔的能量就越少（由10%到1%，慢慢接近为0%），因而在探测器上产生的信号就越小，影响也越小。正由于/subview11930171.htm共焦显微仅对样本/subview/605670/605670.htm焦平面成像，有效的避免了衍射光和和/view/332448.htm散射光的干扰，使得它具有比普通显微镜更高的分辨率，并在生物学中获得了广泛的应用。[1]?构造：/subview/901440/901440.htm共聚焦显微镜主要由五部分组成：显微光学系统、扫描装置、光源、检测器和应用软件系统。整套仪器由计算机控制，各部件之间的操作切换都可在计算机操作平台界面中方便灵活地进行。（1）显微光学系统：显微镜是共焦检测系统常用的组件，是系统成像质量的核心部分。显微镜光路一般采用无限远光学系统结构，可以方便地在其中插入光学元件而不影响成像质量和/view/221981.htm测量精度。/view/475448.htm物镜应选取大/view/716454.htm数值孔径、平场复消色差物镜，有利于荧光的采集和/view/99543.htm成像的清晰。物镜组的转换、/subview/778977/778977.htm滤色片组的选取、/subview/1238516/1238516.htm载物台的移动调节、/subview/605670/605670.htm焦平面的记忆锁定等都可以由计算机自动控制。（2）扫描装置：扫描装置是激光共聚焦检测系统进行大范围检测必需的组件，通常有由丝杠导轨组成的XY平移扫描、由阵镜摆动的扫描等方式。前种扫描方式可以实现大范围区域的扫描，而后者扫描范围相对小一些，不过阵镜摆动扫描可以很快，图像采集速度可以大大提高，有利于对那些寿命短的离子作荧光测定。扫描系统的工作程序由计算机自动控制，与信号采集相对应。（3）光源：光源有/subview/766685/766685.htm单色光（激光）和多色光（/subview/18525/18525.htm汞灯、/subview/2056075/2056075.htm氘灯、卤素灯等）。激光源可以使用多谱线/subview/3842704/3842704.htm氩离子激光器，它提供发射波长为457nm、488nm和514nm的蓝绿光；另外，氦氖绿激光器提供发射波长为543nm的绿光，氦氖红激光器提供波长为633nm的红光。激光源还可以用其他/view/165028.htm半导体激光器。（4）检测器：检测器通常采用/subview/485210/485210.htm光电倍增管（/subview/1150339/1150339.htmPMT）、光子计数器等，通过高速A/D转换器，将信号输入计算机以便进行图像重建和分析处理。通常在PMT前设置针孔，可以采用固定大小针孔或