尹礼国第3章 蛋白质化学.ppt

不可逆沉淀 强烈沉淀条件 破坏Pr胶体溶液稳定性 也破坏Pr结构和性质 沉淀不能再重新溶解 ——变性沉淀 如加热沉淀、强酸/碱沉淀、重金属盐 和生物碱沉淀等 Ⅱ 1.盐析法 加入中性盐脱去蛋白质的水化层，盐析一般不引起变性 等电点沉淀的蛋白质溶液中加入NaCl后沉淀溶解—盐溶 原因？ 盐溶—盐析 分子在等电点时，相互吸引，聚合沉淀，加入少量盐离子后破坏了这种吸引力，使分子分散，溶于水中 盐溶 盐析 向蛋白质溶液中加入大量硫酸铵后蛋白质会沉淀析出 原因？ 蛋白质脱去水化层而聚集沉淀 盐析（（NH4）2SO4） 2.有机溶剂沉淀 脱去水化层以及降低介电常数而增加带电质点间的相互作用 3.等电点沉淀 4.重金属盐沉淀 与带负电荷蛋白质结成不溶性盐 5.生物碱试剂和某些酸类沉淀 与带正电荷蛋白质生成不溶性盐 6.加热变性沉淀 天然结构解体，疏水基外露， 破坏水化层及带电状态 第六节 蛋白质的分离纯化与测定 一、蛋白质分离纯化的一般原则 总目标：增加制品纯度或比活，提高产量 1.前处理：因动/植物/细菌而异 2.粗分级分离：采用盐析/等电点沉淀/有机溶剂分级分离等方法 3.细分级分离：采用凝胶过滤、离子交换层析、吸附层析以及亲和层析等 4.结晶 二、蛋白质的分离纯化方法 （一）根据分子大小不同的纯化方法 1、透析和超过滤 利用蛋白质分子不能透过半透膜将其 与小分子物质分开 半透膜为玻璃纸或纤维素材料 血液透析 小分子溶出 小分子被带出 透析机 透析液 加压 血液 2、密度梯度（区带）离心 60000~80000转/分 重力60万～80万倍 （二）利用溶解度差别的纯化方法 1.等电点沉淀 调整溶液pH 不同蛋白在各自 pI处依次沉淀 2.盐溶和盐析 3.有机溶剂分级分离法 降低介电常数 争夺水化膜 （三）利用蛋白质选择性吸附的性质层析分离 羟磷石灰层析 疏水作用层析 （四）利用对配体的特异生物学 亲和力的纯化方法 亲和色谱颗粒 具有极强的专一性 （五）根据电荷不同的分离方法 电泳 离子交换法 练习题 名解：氨基酸的等电点、蛋白质的等电点、电泳、层析、蛋白质的结构域、蛋白质的超二级结构、分子病、变构蛋白、蛋白质的变性 简述蛋白质水解的方法与原理 简述维持蛋白质构象的化学键 简述维持蛋白质保持稳定的亲水胶体状态的因素 引起蛋白质变性的因素有哪些 简述蛋白质分离纯化的方法与原理 谢谢 * 超二级结构与结构域 （一）超二级结构 定义：在一些具有特殊功能的球状蛋白质分子中，若干个相邻的二级结构单元按照一定规律有规则地组合在一起，彼此相互作用，形成在空间构象上可以彼此区别的二级结构组合单位 常见的超二级结构单元：αα、ββ、βββ的元件 （二）结构域与功能域 定义：二级/超二级结构基础上形成的特定区域。 特点： 结构域自身是紧密装配的，但结构域之间相当松散，存在空穴 结构域存在的原因： 局域分别折叠比整条肽链折叠在动力学上更为合理 结构域之间由肽链连接，有利于结构的调整 蛋白质的三级结构 定义：蛋白质三级结构是蛋白质链的不同区段的R基相互作用形成的空间构象，即肽链所有原子的空间排布。三级结构不包括肽链之间的相互关系。 特点： 较二级结构更复杂 维持 三级结构的化学键 包括一级结构中相距较远的肽段间的几何相互关系和侧链在三维空间中彼此间的相互关系。 四级结构 指由多条各自具有一、二、三级结构的肽链通过非共价键连接起来的结构形式。四级结构是描述蛋白质亚基或亚单位之间的作用力、亚基数目、空间排列方式。 单独的亚基无生物活性。 稳定四级结构的作用力 结构互补（极性）和非共价键 离子键和氢键—缔合的专一性 疏水相互作用—驱动缔合 1、亚基 2、单体 3、原体 四级结构中的概念 几种典型蛋白质的结构与功能 纤维状蛋白质 角蛋白类（毛、发蹄、爪、羽毛、甲壳、指甲、鳞片） 丝蛋白（蚕丝纤维、珠丝纤维、皮等） 胶原蛋白（皮肤、软骨、动脉管壁及结缔组织） 球状蛋白:功能多样、结构复杂，表面亲水、内部疏水 糖蛋白 脂蛋白 第四节 蛋白质的结构与功能的关系 一、一级结构与功能的关系 （一）比较生物化学 各种蛋白质具有一定的结构 不同来源的同功能蛋白质的一级结构基本相同，但在个别位置上存在差异，并表现出种属特异性 胰岛素来源 A8 A9 A10 B30 人 苏 丝 异亮 苏 猪 苏 丝 异亮 丙 狗 苏 丝 异亮 丙 兔 苏 丝 异亮 丝 牛 丙 丝 缬 丙 羊 丙 甘 缬 丙 马 苏 甘 异亮 丙 苏 丝 异亮 丙 一、一级结构与功能的关系 （二）分子进化 问题：在生物进化过