抗体生物制品（参考）.ppt

单克隆抗体 噬菌体抗体 杂交瘤技术 展示技术 宿主细胞: 杂交瘤 细菌 筛选范围 : ~103 107?109 时间: 几个月 几周 操作: 繁杂 相对简单 免疫: 必须 可避免 人源抗体: ? + 费用: 高 低 生产量: 有限 无限 基因获取: 再克隆 直接 应用前景: 有限 不可估 噬菌体抗体库的选择过程 B B B B B B v v Immunotube coated with antigen coated with steptavidin and biotinylated antigen B biotin antigen Solution phase selection with biotinylated antigen Bind to Streptavidin coated microtitre wells Wash to remove unbound phage particles. Elute bound phage Amplify eluted phage Repeat selection Analyze a) ELISA b) Specificity c) Sequencing d) Affinity e) Activity E.coli 感染 和扩增 噬菌体展示技术最关键的优势有三： 淘选的高效率使得在极低的存在 水平下，挑选到高亲和力噬菌体成为可能； 所挑选到的噬菌体可在微量存在的情况下，通过感染细菌得到富集； 展示的多肽或蛋白质与其包含在噬菌体内部的基因密码的连接，使得结合肽或蛋白质的序列分析既快速又简便。 噬菌体（M13, T7, T4, ?) 病毒（反转录病毒，杆状病毒） 表面展示系统 细菌（葡萄球菌，E. Coli) 酵母 体外共价连接（蛋白—DNA, 蛋白—RNA) 噬菌体展示技术的应用现状 抗体： 抗狂犬病毒的单链抗体， 抗HIV-1囊膜糖蛋白的单链抗体，此抗体可专一性杀死被HIV-1感染并表达有gp120的淋巴细胞, 中和响尾蛇毒素的单链抗， 等等。 2.疫苗： 展示在噬菌体表面的HIV-1 的gp120-V3环可 象天然抗原一样引起显著的免疫应答 3.酶： 例：碱性磷酸酶，蛋白水解酶类， 4.底物与抑制剂： 主要是蛋白酶的底物和其抑制剂。 5. 多肽类药物： 如一些激动剂或拮抗剂从多肽库中分离鉴定出来；已获得一13 肽，它能中和蛇毒 ；从CX7C 多肽库中掏选到一个多肽能与 Hantavirus 结合，并使该病毒不能结合或感染细胞。人血管促生素是一种能促进肿瘤血管生长的蛋白，用这个蛋白去淘选一个噬菌体展示多肽库，所获得的一个环状8肽能与血管促生素结合，并能阻遏血管促生素的活性 6. 肿瘤药物导航载体： 用肿瘤细胞特殊的受体蛋白从展示文库中淘 选到的多肽或单链抗体，可以作为抗癌药物 的定向输送工具 。一个成功的实例是：将噬 菌体多肽展示库注射入具有肿瘤的小鼠体 内，然后杀死小鼠，取出肿瘤，再将结合其 上的噬菌体洗脱下