抗原和抗体的制备（参考）.ppt

* * * * 混合 戊二醛法: 半抗原-NH2 载体蛋白-NH2 半抗原-N=CH-(CH2)3-CH=NH-载体蛋白 OHC-(CH2)3-CHO *戊二醛是常用的带有两个活性基团的双 功能联接剂 半抗原-载体连接方法3 氯甲酸异丁脂法： 半抗原-COOH 载体蛋白-NH2 Cl-COO-CH2CH(CH3)2 半抗原-COO-COO-CH2CH(CH3)2 半抗原-CO-NH-载体蛋白 简便，用于类固醇抗原制备 HO-CH2CH(CH3)2 ＋ 半抗原-载体连接方法4 琥珀酸酐法：用于不含羧基衍生物半抗原制备 半抗原-CH2OH CH2-CO CH2-CO 带羧基的半抗原琥珀酸衍生物 半抗原-CH2-OOC-CH2-CH2-COOH 吡啶 再经氯甲酸异丁脂法或碳化 二亚胺法制备载体半抗原   佐剂 概念： 能非特异地通过物理或化学方法与抗原结合从而增强其特异性免疫原性的物质。 条件： ①增加抗原的表面积； ②改变抗原的活性基团构型； ③佐剂与抗原混合能延长抗原在局部组织的存留时间； ④可直接或间接激活免疫活性细胞 ； ⑤无毒性或无副作用。 （二）常用佐剂的种类和制备 1.氢氧化铝佐剂： 5%硫酸铝 5%氢氧化钠 氢氧化铝沉淀 制成悬液 即为佐剂 强烈搅拌 NS洗 二次 NS 等体积抗原 免疫接种 常用佐剂的种类及制备 2.明矾佐剂 10%硫酸钾铝 氢氧化钠校正pH值至6.5 沉淀 乳状悬液 * 明矾佐剂抗原常用于肌肉注射，皮下注射 易引起肉芽种和脓肿。 NS搅拌 NS洗 二次 离心 抗原 备用 防腐剂 作用大于不完全佐剂 局部形成肉芽种和溃疡 不能用于人体 弗氏完全佐剂 3.弗氏佐剂(Freund adjuvant) 液体石蜡 完全乳化 备用 ＋ 高压 灭菌 加热 抗原 弗氏不完全佐剂 卡介苗 羊毛脂 鉴定 一滴 乳剂 乳剂不散浮于液面 水中 混合 ①增强抗原对机体的免疫原性； ②增强抗体的产生能力； ③为制备出高效价的免疫血清； ⑤在某种情况下，改变Ag免疫应答类型； ⑥延长抗原在免疫动物的时间； ⑧增强局部对变应原的超敏反情况。 佐剂的作用 人工抗原及基因工程抗原 用化学合成法或基因重组法制备含有已知化学结构决定簇的抗原，称之为人工抗原。 它可包括人工结合抗原、人工合成抗原和基因重组抗原。 人工合成抗原 用化学方法将活化氨基酸聚合，使之成为合成多肽。应用这种人工合成多肽可作为抗原。 只由一种氨基酸形成的聚合体称为同聚多肽，如由左旋赖氨酸形成的同聚多肽。 由二种或二种以上氨基酸形成的聚合多肽称为共聚多肽，如由酪氨酸、谷氨酸与多聚丙氨酸和赖氨酸组成的聚合成多肽。 基因工程抗原 将编码免疫原性氨基酸序列的基因克隆化并与适当载体DNA分子相结合，然后引入受体细胞中使之表达，即能获得免疫原性之融合蛋白，经纯化后即基因工程疫苗。 基因工程乙型肝炎病毒疫苗和在牛痘苗表达系统中研制乙肝病毒的重组感染载体的多价疫苗。 小结 抗原的种类 颗粒性抗原的制备 可溶性抗原提取分离纯化方法 抗原的鉴定 半抗原免疫原的制备 佐剂的作用 第二节 抗体的制备 多克隆抗体的制备 单克隆抗体技术 基因工程抗体 多克隆抗体的制备 1.免疫动物选择 2.免疫方法 3.动物采血法 4.免疫血清的分离及保存 免疫动物的选择 能作免疫接种用的动物主要是哺乳类和禽类。兔、绵羊、豚鼠、鸡、山羊和马。 免疫动物的选择原则： 1.抗原与免疫动物种属差异越远越好； 2.动物必须适龄、健壮、无感染的正常动物、 体重合乎要求； 3.不同动物种类对同一免疫原有不同的免疫应答； 4.按需要量选择大小不同的动物。 免疫方法 1.免疫原的注射剂量 2.免疫途径：免疫反应产生速度依次为静脉＞ 腹腔＞肌肉＞皮下＞皮内＞淋巴结＞足掌 3.免疫方案 ①全量免疫法：弗氏佐剂抗原多次注射 ②微量免疫法：卡介苗 弗氏佐剂 抗原 ③混合免疫法：综合皮下、淋巴结和静脉 7天 1月 1.颈动脉放血法 2.心脏采血法 3.静脉采血法 动物采血法 免疫血清的分离和保存 免疫血清的分离 1、室温自然凝固，然后放置37℃或4℃待凝 块收缩，分离血清。 2、 抗血清分出后要经56℃30min灭活。 免疫血清的保