流式细胞仪基本原理及应用（参考）.ppt

-*- 血小板活化 静止血小板 活化血小板 -*- 血小板活化 -*- 网织血小板 ITP(特发性血小板减少症) 化疗 鉴别诊断 骨髓移植 -*- 血小板计数新标准(间接双平台法) R = 红细胞数/血小板数(流式细胞术) 血小板数=红细胞数(血球仪)/R (国际血液学标准化委员会(ICSH)/国际实验血液学协会(ISLH) 2001) 灵敏度高(1- 400x109/L)， 重复性好，室内/室外变异系数均很小 尤其应用于血小板预输注病人的检测 (阈值:20x109/L) -*- 其 它 -*- HLA-B27 -*- 正常人 患 者 HLA-B27 -*- 细胞介导的细胞毒作用 活靶细胞 死靶细胞 替代51Cr释放实验 -*- HLA-B27检测 Calibration beads HLA-B27 calibration beads Decision marker HLA—B27FITC（MFI) -*- 流式临床应用发展 白血病/淋巴瘤免疫分型 HIV感染的CD4绝对计数 CD34绝对计数/异体移植的免疫重建 抗原特异性T细胞检测 树突状细胞（DC） 循环微转移肿瘤细胞 I II III IV Marti GE, Maryalice SS, et al. Introduction to Flow cytometry. Seminars in Hematology, 2001;38(2):93-99 -*- 流式微球分析 Cytometric Bead Array（CBA） -*- CBA与ELISA相比优点 “多元”和“同步”检测 样本量少 灵敏度相似 稳定性好 * * * * * * * * * * * * * * -*- 淋巴细胞亚群检测意义 疾病机理研究 疾病辅助诊断 移植后免疫检测 治疗方案的确定及疗效评价 CD25高于正常值5-10%, 表明即将或已发生排斥 CD4/CD8比值下降提示并发凶险感染 0.2时, 必须停用免疫抑制剂 CD2+HLA-DR+增加5-10%, 且不伴有CD25的增加, 提 示巨细胞病毒感染 慢性疲劳, 感染后综合征, 纤维肌痛, 类风湿性关节炎, 过敏等 疾病预防 -*- 淋巴细胞亚群检测意义 　 Control （n=20) Active SLE (n=17) Stable SLE (n=13) CD3 70.4± 5.87 65.8± 10.9 68.5± 8.95 CD4 35.0± 5.70 22.1± 4.15** 34.5± 4.23 CD8 27.9± 5.73 45.7± 9.58** 32.7± 9.01 CD4/CD8 1.27± 0.14 0.43± 0.12** 1.05± 0.26* NK 17.8± 5. 48 4.37± 3.31** 7.59± 5.01** 鉴别活动期和非活动期SLE -*- HIV AND AIDS -*- Th1/Th2细胞 -*- Th1/Th2细胞 Th1型细胞因子介导 细胞免疫反应 引起迟发型过敏反应、巨噬细胞活化、局部炎症 刺激来源：病毒、某些细菌 Th2型介导体液免疫反应 引起B细胞增殖、分泌多克隆免疫球蛋白、 促进I型变态反应（过敏反应） 刺激来源：多细胞寄生虫、过敏原 -*- Th1/Th2细胞 PMA+Ionomycin 刺激4-6hr -*- 流式细胞仪检测胞内细胞因子 新鲜分离PBMC 加PMA＋Io刺激后6h 测定胞内细胞因子IL-4和IFN-g 检测免疫细胞表型和结合检测胞内细胞因子： 操作和分析