标记物的制备与鉴定.ppt

标记物制备与鉴定 125I- 125I或125I+ 125I-标记物 （混合物） Ch-T、LPO氧化 取代反应 直接标记法 化学或酶促反应，将 放射性负电碘离子氧 化成碘原子或正电碘 离子，通过取代反应 置换被标记物分子中 酪氨酸或酪胺残基以 及组胺残基上的氢原 子。 使用无还原剂的高比放射性碘源 被标记物用量要少 ch-T用量要低 控制总反应体积200μl 反应时间1-2分钟 弱碱性反应条件 bolton-Hunter 间接标记法 联接标记( bolton-Hunter )预先将125I 用ch-T法标记琥珀酰 胺酯，制成的125I 化 脂功能基团可与蛋白 分子上的氨基酸残基 反应，从而使待标记 物被碘化。 聚合、损伤物 标记蛋白 游离125I 125碘-标记物的制备－纯化 凝胶过滤法 离子交换层析法 聚丙烯酰胺 凝胶电泳 高效液相色谱法 125碘-标记物的制备－鉴定 放射化学纯度 单位标记物中结合于被标记物上的放射性占总放射性的百分率 应大于95% 免疫活性 标记物与抗体结合的能力 标记物与过量抗体反应百分比 该值越大, 标记物免疫活性好 结果准，测定复杂 比放射活性 单位化学量标记物中含的放射性强度 单位：Ci/g mCi/mgCi/mmol 比放射性过高，将影响标记物免疫活性 计算法：依据标记反应中放射