第09章吸光光度法,修改16.11.ppt

例 : (橙色) (黄色) λmax=450nm A总 包括离解、缔合、生成新物质、形成异构体 使原物质浓度改变 吸光度值变化 产生偏离 pH ， 平衡 移, （3）溶液内部的化学变化 二 . 吸光光度法的基本原理 分光光度法 : 仪器—分光光度计 基本组成： 光源 单色器 样品室 显示器 检测器 三. 仪器和方法 ＊ 光源 (钨灯、氢灯、氘灯） 能发射紫外光区或可见光谱区的连续光谱； 足够的辐射强度、稳定性较好、使用寿命较长 基本要求 : 常用的光源 : 可见光区: 钨灯 (辐射波长为320nm~2500nm) 紫外区: 氢灯、氘灯(辐射波长为185nm~400nm) 三. 仪器和方法 ＊ 单色器 作用 : 将光源发射的复合光分解成单色光 （棱镜或光栅） 三. 仪器和方法 组成 : (1)棱镜或光栅等色散元件 (2)狭缝和透镜等 将光源发射的复合光分解成单色光的光学系统 棱镜分光 三. 仪器和方法 入射狭缝：光源的光由此进入单色器 准光装置：透镜或反射镜使入射光成为平行光束 聚焦装置：将分光后的单色光聚焦至出口狭缝 （透镜或凹面镜） 色散元件：将复合光分解成单色光 光栅分光原理 三. 仪器和方法 利用不同波长入射光产生干涉条纹的衍射角不同而将复合光分成单色光。 ＊ 样品室 用于放置各种类型的吸收池(比色皿)和相应的池架附件 三. 仪器和方法 比色皿厚度: 0.5, 1, 2, 3, …cm 比色皿: 石英池和玻璃池 ＊ 检测器 作用:通过光电效应，使透过吸收池的光信号变成可测的电信号的装置。 （光电管或光电倍增管） 三. 仪器和方法 要求：对测定波长范围内的光有快速、灵敏的响应，产生的光电流应与照射于检测器上的光强度成正比。 (1)光电管 (2)光电二极管阵列 (1)光电管 三. 仪器和方法 涂光敏材料 光照 光敏材料 产生电子 产生电流 电压 光强度大 电流大 (2)光电二极管阵列 三. 仪器和方法 电容器 充电 电容器 放电 光照射 再次充电 测量周期 电容器充电的电量?每个二极管检测到的光子数目成正比?光子数与光强度成正比。通过测量整个波长范围内光强的变化就可得到吸收光谱。 ＊显示器 由检流计、数字显示、微机组 成的自动控制和结果处理系统 三. 仪器和方法 四、显色反应和显色条件的选择 1.显色剂作用 2. 显色反应的选择 3. 影响显色反应的因素 4. 显色剂的分类 1.作用 无色或浅色 试样 有色物 +显色剂 比色 显色反应 配合反应 氧化还原反应 缩合反应 重氮化—偶氮化反应 四、显色反应和显色条件的选择 2.显色反应的选择 灵敏度高 ?=104－105 (2) 选择性好 (3) 有色物组成恒定，化学性质稳定 (4) 显色剂在测定波长处无明显吸收 对比度=λmax有色物 -λmax显色剂＞60nm 四、显色反应和显色条件的选择 3.影响显色反应的因素 (1) 显色剂用量 根据吸光度A与显色剂浓度cR的关系来确定 cR选择——引起A变化最小处的cR（即曲线平坦处） M + R MR 四、显色反应和显色条件的选择 例： Fe(ssal)+ 紫红色 pH=1.8~2.5 pH=4~8 Fe(ssal)-2 橙红色 pH=8~11.5 Fe(ssal) 3 3- 黄色 显色时间和温度:由实验得出 溶剂:一般选择水作溶剂 (2) 显色溶液的pH值 测定不同pH值下，显色溶液的吸光度A，以A为纵坐标，pH为横坐标，制图。 pH选择:曲线平坦处pH 四、显色反应和显色条件的选择 (3) 共存离子的干扰 可能存在的几种情况： 本身有颜色 与显色剂反应生成有色物 消除的方法： * 加掩蔽剂 （掩蔽剂不与被测离子反应，本身及反应产物不影响测定） * 选择合适的显色反应条件 * 分离干扰离子 与显色剂 与被测物 生成更稳定的有色物 共存离子 四、显色反应和显色条件的选择 显色剂的种类 : 无机显色剂 过氧化氢 钼酸铵 硫氰酸盐等 有机显色剂 生色基团：偶氮基、硫羰基、亚硝基等 助色基团：含胺基、羟基等 四、显色反应和显色条件的选择 1. 入射光波长的选择 2. 参比溶液的选择 3. 读数范围的选择 五. 测量条件的选择 1. 入射光波长的选择 : 一般选择最大吸收波长λmax 若有干扰按实际情况而定 波长选择适当，可提高灵敏度和准确性 原则： 吸收最大，干扰最小 五. 测量条件的选择 2.参比溶液的选择 （在测定波长处） 溶剂空白 试样空白 试剂空白 试样+掩蔽剂 +显色