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双孢蘑菇，姬松茸，灵芝和桑黄的多糖提取物的抗氧化和免疫调节活性的研究 课程：糖类和脂类化学 任课教师：王萍 学生：贾庆伟 专业：2013级食品加工与安全 双孢蘑菇，姬松茸，灵芝和桑黄的多糖提取物的抗氧化和免疫调节活性的研究 Maja Kozarski a,c, Anita Klaus a, Miomir Niksic a, Dragica Jakovljevic b, Johannes P.F.G. Helsper c, Leo J.L.D. Van Griensven c.* 食品技术和生物化学学院，贝尔格莱德大学,塞尔维亚 化学，技术和冶金研究所，贝尔格莱德大学，塞尔维亚 国际植物研究所，瓦赫宁根大学和研究中心，荷兰 1.简介 自由基发挥了重要的积极的生理作用，并且，在同一时间，它们可以发挥毒性作用。他们是正常的细胞新陈代谢过程中产生的，氧化磷酸化作用的副产物。自由基参与 信号转导和基因表达的调节， 激活受体和核转录因子。他们在吞噬也发挥了至关重要的作用。另一方面，有越来越多的证据表明，自由基可能起致病作用。在各种疾病包括心脏疾病，癌症，帕金森氏和阿尔茨海默氏病，免疫功能受损，白内障，老年人肌肉退化。所有生物通过防御系统保护自己不受到自由基损伤，包括超氧化物歧化酶和过氧化氢酶或抗坏血酸，生育酚和谷胱甘肽，改善抗氧化状态可能有免疫刺激作用。 人类的抗氧化状态反映了抗氧化防御和促氧化的条件之间的动态的平衡。当抗氧化保护的机制变得不平衡时，如老化因素，可能会损害生理功能，导致疾病和加速老化。补充抗氧化剂或含有高浓度抗氧化剂的食物可能有助于减少氧化损伤。鉴定新的抗氧化剂仍然是一个高度活跃的研究领域。多糖是潜在有用的用于药物用途生物活性成分，例如用于免疫调节，对抗辐射，抗凝血，抗肿瘤，抗HIV和降血糖活性。在日本，韩国和中国，蘑菇类多糖中的香菇多糖，裂褶菌多糖和云芝多糖已被认可为具有免疫调节活性的。 多糖的活性是通过其构象，组成和大小决定的。在来源广泛的真菌中，担子菌以及从子实体和菌丝体培养是药用的具有生物活性的多糖的较高来源。大多数具有生物活性蘑菇多糖是β-（1-3）（1-6）-葡聚糖，有些是杂多糖。在担子菌发现活性葡聚糖α-和β-构都含有。一些葡聚糖在蛋白质或肽残基中，以蛋白多糖的形式存在。本研究的目的是评估和比较从药用真菌物种中热水提取的多糖抗氧化性能和免疫调节作用，包括双孢菇，姬松茸，灵芝，和桑黄多糖。 该多糖提取物的结构是由红外光谱（FT-IR）和糖成分被酸水解，高效液相色谱法（HPLC）分析后确定的。研究其抗氧化活性采用方法有：共轭二烯法，还原力， DPPH法和亚铁离子螯合能力法。免疫调节是在体外进行测试，通过用酶联免疫吸附测定法（ELISA）测量细胞因子的合成 。 2.材料和方法 2.1.化学制品 1,1 - 二苯基-2 - 苦基苯肼（DPPH），硫酸亚铁，氢，铁氰化钾，氯化铁，亚油酸，牛血清，白蛋白（BSA），考马斯亮蓝G-250，三氟乙酸 ，（TFA），吐温20，氯化亚铁，菲洛嗪–γ的检测范围是为7.81-1000Pg/ml。 2.12 .统计分析 所有抗氧化活性进行了三次重复试验，免疫调节活性进行了四次重复试验。该结果被报告为SEM的平均值±标准误差。 抗氧化活性采用单因素模块（ANOVA ）进行方差分析，进一步的比较采用Fisher最小显著差异（ LSD ）P = 0.05 。 IFN -γ平均值的比较采用单因素方差分析（ANOVA ）， Dunnett检验，然后用来比较所有治疗组与对照组（p = 0.05 ） 。 统计分析采用MS Excel （微软Office 2007专业版） 。 EC 50值的计算是通过使用在线免费统计回归计算进行线性回归进行分析（ /statistics/regression.php ） 。 多糖，蛋白质和抗氧化剂之间的相关系数r，使用MS Excel进行分析。 3 .结果与讨论 3.1 .多糖分析 3.1.1 .综合分析 图1：从子实体获得多糖提取物的红外光谱 双孢蘑菇（AB）姬松茸（ABR）; 桑黄（PL）和灵芝孢子（GL）。 姬松茸在热水中提取的多糖的FT-IR光谱符合多糖的一般特性（图1） 。在3000-3500cm-1之间出现宽峰,属于O-H的伸缩振动,说明这些组分均具备了糖类化合物所应有的分子间和分子内的氢键。在1028 cm-1出现属于的 C-O伸缩振动， 1153 cm-1的伸缩振动表示C-O – C的存在，及1000、1100、1079 cm-1之间的现象是由于存在O-取代葡萄糖残基的β-葡聚糖。在1635 ， 154