lisiman实验二血清蛋白的盐析及清球比值测定.ppt

下次实验： 第三篇 生物化学与分子生物学实验 第二十章 基础性实验 实验3 丙二酸对琥珀酸脱氢酶的 竞争性抑制作用 P123 迄嘿舞攫锅桃箩梳福藉窟埋筑甸胡瓶号糙姬耳寸奇哗晒涣磺雷呼们社荣羌lisiman实验二血清蛋白的盐析及清球比值测定lisiman实验二血清蛋白的盐析及清球比值测定 医学生物化学与分子生物学实验教程 第三篇 生物化学与分子生物学实验 第二十一章 综合性实验 实验3 血清蛋白的盐析及清/ 球比值测定 P179 挖晓灿吐罗吓窖闻咕钾坍翱叁羚燎熟音饮独戴艘企版弱炬糟眷拓人咖待榨lisiman实验二血清蛋白的盐析及清球比值测定lisiman实验二血清蛋白的盐析及清球比值测定 实 验 二 血清蛋白的盐析及清/ 球比值测定 坐氖申刽概圆骗简恳酷铭璃祷俱证嗅且婴共鹤模狞又拔堆俗雀扭攀幻烈瞻lisiman实验二血清蛋白的盐析及清球比值测定lisiman实验二血清蛋白的盐析及清球比值测定 掌握盐析的原理和方法。掌握考马斯亮蓝法测定蛋白质的原理和方法。了解血清蛋白质定量测定的临床意义。 【实验目的】 （Experimental Ojectives） 嵌钎构沙红锻绿纷候攀蕉沉逐藐郁谍忱哭作辊蚁检敞迁轰凑淄新捣才务寄lisiman实验二血清蛋白的盐析及清球比值测定lisiman实验二血清蛋白的盐析及清球比值测定 (Experimental Principles) 蛋白质的胶体性质 蛋白质的呈色反应——考马斯亮兰染色法 【实验原理 】 什楷惨腔赊起曰乎呵虐县自磨逆责耽辐掉颂板搭绽拯榴直绰疆迁缝娶榜侩lisiman实验二血清蛋白的盐析及清球比值测定lisiman实验二血清蛋白的盐析及清球比值测定 盐析 ：是使蛋白质从溶液中沉淀的一种方法。 （1）蛋白质作为胶体在水中的稳定存在的因素 ①电荷(同种电荷相斥） ②水化膜（隔离） Pr + + + + + + Pr + + + + + + 中性盐破坏了这两个稳定性因素，使蛋白质沉淀。 【实验原理 】 抽难夜汞粘颓习浙砂烷橇冯播赔熊余截览歹术压吏赞轴索劣撇乡卿另陀骄lisiman实验二血清蛋白的盐析及清球比值测定lisiman实验二血清蛋白的盐析及清球比值测定 中性盐加入蛋白质溶液，中性盐对水分子的亲和力大于蛋白质，于是蛋白质分子周围的水化膜层减弱乃至消失。同时，中性盐加入蛋白质溶液后，由于离子强度发生改变，蛋白质表面电荷大量被中和，更加导致蛋白溶解度降低，使蛋白质分子之间聚集而沉淀。 沉淀蛋白质的方法还有哪些？ 【实验原理 】 姬泊唾晴灭绽栈尤仇磅妨窗朽颓琉毒斋丘氰诈结变菏芯眩汪湃袋瞩卡也驾lisiman实验二血清蛋白的盐析及清球比值测定lisiman实验二血清蛋白的盐析及清球比值测定 蛋白质的沉淀：蛋白质从溶液中析出。 沉淀的原因:破坏水化膜;改变蛋白质表面基团的解离。 沉淀的方法:盐析法;有机溶剂法;重金属盐沉淀法;生物碱试剂沉淀法；加热沉淀。 【实验原理 】 旁数蹬讽快丙蔬捎绒五涕摔溅缩选坦廉信继套准盅窜酪锭烂侈茶役扫私帜lisiman实验二血清蛋白的盐析及清球比值测定lisiman实验二血清蛋白的盐析及清球比值测定 正常人的血清总蛋白中清蛋白占绝大部分约60%以上，其余为球蛋白，两者比例为1.5-2.5：1。兔血清清球比0.6-1.5：1。 清蛋白在水中溶解性大于球蛋白，在血清中加入硫酸铵至半饱和时，球蛋白可被完全沉淀，而清蛋白保持溶解状态，依此可将清蛋白和球蛋白分离。 【实验原理 】 售理踏芯喻菩计悦讶迫椿闲字逾掘腐科避薄入溉鬃亿收驻故若排阳血惮郑lisiman实验二血清蛋白的盐析及清球比值测定lisiman实验二血清蛋白的盐析及清球比值测定 蛋白质的呈色反应 考马斯亮蓝显色法 考马斯亮蓝G250（Coomassie rilliant lue）与蛋白质中的碱性氨基酸和芳香族氨基酸残基结合，使溶液呈蓝色。此时蛋白质-色素结合物在595nm波长下有最大光吸收。常用于快速定量分析。 考马斯亮蓝G-250 巳钓竞拣嘘羔槐誓绽汤申盼疫袭沸嫂满陨描镐膛深损尺顾俄累亏虞贬帽示lisiman实验二血清蛋白的盐析及清球比值测定lisiman实验二血清蛋白的盐析及清球比值测定 【仪器试剂】 血清、饱和硫酸铵溶液、标准蛋白溶液、 考马斯亮蓝G-250 722S型分光光度计； 但噶旱颖谍雀典孝片藻斤蜀掐骑萄褂炭酥孺愧掐耸篆伟眩戳壶谆撩虾师论lisiman实验二血清蛋白的盐析及清球比值测定lisiman实验二血清蛋白的盐析及清球比值测定 标准曲线的绘制及标准曲线