徒手切片的基本要求.doc

、目的与要求1、学习并掌握临时装片的制作方法和步骤。2、学习徒手切片技术。3、了解细胞基本结构和厚角组织的特点。二、材料和用品1、自备材料：解剖器（镊子 、解剖针、单面刀片或双面刀片）；洋葱鳞茎、青红椒、芹菜叶柄、女贞叶片或其它植物的叶片、胡萝卜块等。2、其它材料和用品：显微镜、盖玻片、载玻片、纱布、蒸馏水、吸水纸、10%甘油水溶液、50%甘油水溶液、纯甘油、碘—碘化钾稀溶液、培养皿、吸管。三、实验内容??? 1、临时装片的制作方法??? 2、徒手切片方法四、实验方法 要观察、研究植物细胞、组织和器官的微细结构，以及一些很微小的藻、菌植物等，这些用肉眼是无法看到的，必须借助于显微镜来观察，要用显微镜观察，首先必须制成各种制片，放在显微镜下才能观察。制片的方法很多，这里着重介绍临时装片法和徒手切片的方法技术。1、临时装片的制作方法临时装片法是用少量的新鲜植物材料，如单个细胞、薄的表皮或切成的薄片以及其它小的或扁平的材料（如丝状或叶状的藻类、菌类、蕨类的原叶体和孢子囊、纤细的苔藓植物等等），把这些材料放在载玻片的水滴中，再盖上盖玻片做成玻片标本的方法。这种方法制成的标本，可以保持材料的生活状态和天然的色彩。此法一般多做为临时观察使用，也可根据需要选择适宜的染料染色，制成永久制片或用某些化学试剂作组织化学反应。??? 临时装片的制作方法和步骤如下：（1）清洁玻片：将盖玻片和载玻片用清水洗净，再用纱布擦干，擦玻片时用左手食指和拇指夹住玻片的两边，右手食指和拇指包住纱布，同时擦到的玻片的两面，用力要均匀。注意：由于盖玻片很薄，所以擦盖玻片时要特别小心，用力要轻，右手食指和拇指要轻轻捻动，以免把盖玻片捏破。（2）放置材料：先将载玻片平放在桌面上，于载玻片中央滴一滴蒸馏水或稀甘油，然后用镊子镊取或吸管吸取少量要观察的材料（如洋葱鳞叶表皮或水绵……），放在载玻片中央的水滴或甘油中，再用镊子和解剖针将材料展平或分散开，勿使材料折叠或干燥。（3）加盖玻片及其它处理：为了避免产生气泡 ，盖盖玻片时，应该以大拇指和食指拿着盖玻片的两个角或用镊子夹住其一端，使盖玻片的一边先与载玻片上的水滴边缘接触 ，而后徐徐放下另一边，当盖玻片被夹持的一边将贴近载玻片时，则可放手或抽出镊子，使其自然轻轻复盖，这样可以使盖玻片下的空气挤出，免生气泡。注意载玻片中央的液滴要适中，既要使其充满盖玻片，又要不会使盖玻片浮动或使液滴从盖片下外溢，假如水不够，可用吸管小心地从盖玻片的边上再滴入一小滴水，使它和盖玻片下面的水相接触；如果水太多，溢出盖玻片，则可用吸水纸吸去，盖玻片的上面，一定不能被水浸湿，如果发生这种情况，应该小心地取下盖 玻片，擦干以后，再按上述方法重新盖上。这样做好的装片，便可在显微镜下进行观察。根据需要，临时水装片做好后还可以进行简单的染色（例如用碘—碘化钾或番红等来染色），其方法是直接在盖玻片的一侧加一滴染液，用吸水纸条在盖玻片的另一侧吸水，引入染液，以使盖片下的材料染上色。注意：临时装片根据需要可以水封片或以甘油封片，凡用以临时观察，不欲久留的装片均可用水封片，制成水装片；需要提前半天或一天就备出的装片或者观察后须保留一定时间的装片，为防止水分蒸发，出现材料收缩现象，则适宜用甘油封片，制成甘油封片，用甘油封片时，保留时间短者，可用10%甘油水溶液，保留时间长者则须从10%甘油中再转入50%甘油水溶液中或在此液中浸一小时后再转入纯甘油中封片。用甘油做临时装片的优点是不仅封片保留时间长，且有加强材料透明的作用。本实验以洋葱（或大葱）鳞茎内表皮为材料，通过撕皮法做临时装片，用碘—碘化钾做染色剂，在观察做片效果时同时了解细胞的基本结构，如细胞壁、细胞质、液泡、细胞核等。2、徒手切片法 徒手切片法简称手切片法，即手拿刀片将材料切成能在显微镜下观察其内部结构的薄片的方法。是植物形态解剖学实验及研究中最简单和最常用的方法，也是最重要的基本技能之一。徒手切片的材料一般是新鲜的，有时也可用预先固定好的。这种切片方法虽然有其缺点，如：不易做到将整个切面切得薄而完整，往往切出的片子厚薄不一；过软过硬的材料比较难切。但其优点很多，如：工具简单，只要有一把锋利的剃刀或双面刀片就够了；方法简便，容易学会；节省时间，只要有现成材料，可以立刻用刀片切成薄片，当即观察，即便要染色，时间也不长；还有一个独特的优点就是可以看到组织细胞内的自然结构和天然颜色。?? 徒手切片的方法见图2—2。一般材料的徒手切片方法（1）将材料切成长约2～3厘米的小段，削平切面。（2）左手大拇指和食指的第一关节指弯夹住材料，使之固定不动摇。为防止刀伤，拇指应略低于食指，并使材料上端超出手指2～3毫米，不可高出过多，否则切片时材料容易动摇，也不容易切薄。（3）右手大