时间分辨HBCAB-IGM操作规程.doc

乙型肝炎病毒核心抗体IgM诊断试剂盒 时间分辨免疫荧光分析法 标准操作规程 文件编号 编写者 编写日期 审核者 批准者 医院 医院： 科： 室： 乙型肝炎病毒核心抗体IgM诊断试剂盒 时间分辨免疫荧光分析法 标准操作规程 版本： 执行日期： 共3 页 第 1 页 1.原理 本试剂盒采用抗人-IgMu链抗体包被反应孔，配以HBcAg抗原和铕标记抗-HBc抗体，采用捕获法原理检测人血清中的乙肝核心抗体IgM。加入校准品及待测样本后，样本中抗-HBc-IgM抗体与已包被的二抗结合成抗人-IgM-抗HBcIgM抗体复合物，再加入铕标记单克隆抗-HBc抗体与HBcAg抗原，联接成抗人-IgM-抗HBcIgM抗体-HBcAg-抗HBc-DTTA-Eu复合物。增强液（β-NTA）将复合物标记抗体上的Eu3+离子解离到溶液中，并与增强液中有效成分形成高荧光强度的鏊合物，荧光强度和样品中的核心抗体IgM浓度成正比，。通过校准品保证试剂盒的灵敏度，并用以确定试剂盒的CUT OFF 值，样本的阴阳性结果通过与CUT OFF比较后确定。 2.样本处理 血液样本尽快送实验室，室温下离心分离出血清，置于洁净离心管中保存。 3.试剂 本科室使用苏州新波生物技术有限公司乙型肝炎病毒核心抗体IgM时间分辨免疫荧光法诊断试剂盒，试剂盒主要组分如下： 核心抗体IgM校准品A-F各一瓶（1ml） 铕标记物：1瓶(0.4m1) 使用前按需要1：50倍稀释 包被反应板：1块（12×8） HBcAg抗原：1瓶(0.4m1) 使用前按需要1：50倍稀释 铕标记稀释液：1瓶(20m1) 浓缩洗液：1瓶(40 m1)，使用前用去离子水做1：25倍稀释 增强液：1瓶(20 m1) 样本稀释液：：1瓶(20 m1) 封片纸：3张(封板用) 吸头：20支 说明书：I份 医院： 科： 室 乙型肝炎病毒核心抗体IgM诊断试剂盒 时间分辨免疫荧光分析法 标准操作规程 版本： 执行日期： 共 3 页 第 2 页 4.仪器（用户自备） 时间分辨荧光分析仪，ANYTEST2000； 微孔洗涤机，Egate2310； 微孔振荡器，2510变频振荡器； 5.操作步骤 工作洗液：将浓缩洗液做1：25倍稀释，作为工作洗涤液； 将试剂及所需数量的微孔反应条置室温(20—25℃)平衡。 按实验所需要用量，将铕标记抗体和HBcAg抗原均按1：50一起加入到同一瓶铕标记稀释液中，混均。 取110ul校准品，按顺序加入微孔反应条小孔中。 取10ul已按1：100预稀释的待测标本，按顺序加入已有标本稀释液的微孔 在室温下，用振荡器缓慢震荡孵育30分钟。 在第一次孵育结束后，用微孔洗涤机洗涤4次。 加分析试剂：每孔加入100 ul含铕标记抗体和HBcAg抗原的分析试剂。 在室温下，用振荡器缓慢震荡孵育30分钟。 第二次孵育结束后，重复用微孔洗涤机洗涤6次。 每孔中加入增强液100u1(加样过程中避免碰到小孔边缘或其中的试剂，尽量 避免污染)，并加贴封片纸。 微孔反应条用振荡器轻摇5分钟，检测(在半小时内完成) 6．临床意义 乙型肝炎病毒核心抗体IgM是人体感染乙型肝炎后,对乙肝病毒核心抗原的免疫反应所产生的一种乙肝核心抗原的抗体,是乙肝感染后最早出现的一种特异性抗体.在乙肝病毒感染后的急性发病期明显增高,呈高滴度,急性肝炎患者可通过检测这种抗体阳性(高滴度)而肯定乙型肝炎诊断.抗-HBc.IgM作为肝炎标志物,其检测可用于急性肝炎、慢性活动性肝炎、爆发性肝炎的诊断。本试剂盒用于乙型肝炎病毒核心抗体IgM的临床检测。 医院： 科： 室 乙型肝炎病毒核心抗体IgM诊断试剂盒 时间分辨免疫荧光分析法 标准操作规程 版本： 执行日期： 共 3 页 第 3 页 7.参考值 本试剂盒CUT OFF值为27.0 PEI U/L。 8．检验结果的解释 建议≥CUT OFF值的样品判断为阳性，否则为阴性。A点计数值应8000，F点计数值60000。否则试验无效，全部试验重做。 9.注意事项 9.1理解说明书，不要混用不同批号的试剂，不要使用过期的试剂。 9.2尽量建立一个干净无尘的实验室环境，对实验的成功起到决定性作用。(因为尘土中含有很多金属离子，会影响实验结果)。 9.3试剂盒与被测样本使用前必须达到室温。 8.4振荡器按照《2510变频振荡器标准操作规程》设定需要的振荡频率。 9.5微孔洗涤机按照《Egate2310全自动微孔洗涤机标准操作规程》在每天使用前应进行校正注液量和残留量，注意管道是否畅通。洗涤时，确认每孔必须是干的，洗涤液都