环境生物技术.docVIP

1.酶的基本概念 ?酶的化学本质是蛋白质，这一点是被生物化学所证明了的，研究酶的化学本质，可用研究蛋白质的方法进行研究。 ?一般情况下，一个结构完整的酶包括蛋白质和非蛋白质两部分，蛋白质部分称为辅基酶蛋白，非蛋白质部分称为辅助因子，辅基酶蛋白和辅助因子构成一个全酶。辅助因子的化学本质因不同的酶而不同，它可以是小分子量的有机化合物，也可以是无机矿物质离子。 酶的活性中心 构成酶活性中心的氨基酸在一级结构上, 呈分散状态，这些氨基酸是通过酶蛋白的二、三、四级结构使得其在空间上彼此集中，构成一个特定的与酶活性表达有关区域，这个特定区域即酶的活性中心(active center)，换句话说，酶的活性中心是酶分子上的与底物结合并催化反应的特定基团或特定区域。 酶活性中心包括两部分，其一是底物结合部位，其二是催化部位。 3.酶的催化机制 ?酶与底物结合完成催化反应，被多数人接受的有两种假说，即钥匙学说诱导契合学说。 4.两种学说 钥匙学说(lock and key theory) ?1894年，E.Fisher提出酶与底物作用的钥匙学说，以解释酶与底物之间的专一性问题，其基本含义是：酶与底物分子或底物分子的一部分之间，在结构上有严格的互补对应关系，当底物与酶结合时就象钥匙和锁那样契合对应。 诱导契合学说(induced-fit hypothesis) ?1958年，Koshland提出了诱导契合学说，其主要内涵是：当酶与底物分子接近时，酶蛋白受底物分子的诱导，其构象发生有利于与底物分子结合或催化的变化，酶与底物在此基础上互补契合，以发挥酶的催化功能。 酶的命名原则 一般每一种酶有两个名称： 一个是它的习惯名称，其习惯名一般是根据它的催化底物来命名的。淀粉酶(Diastase)，蛋白(Protiase)，果胶酶(Pectinase)等。 另一个是其系统名称，国际生物化学协会(International Union of Biochemistry)酶学委员会(Enzyme Commission)。于1961年该委员会正式提出了酶的系统命名方案。 ⑴将底物和催化的反应同时考虑，进行命名，如：α-1 ，4葡萄糖水解酶； ⑵对于双底物的将两底物用冒号分开：如：ATP:己糖磷酸转移酶； ⑶对可逆反应的，一般正反应和负反应用同一个名称，主要考虑催化的主要方向，或根据首先证明的催化反应来确定。如乳酸脱氢酶 Michaelis-Menten方程 单底物酶促反应模型: k1 kp E+S────ES────E+P -k1 迅速平衡学说对上述反应模型有两点假定： ①酶与底物结合形成酶底物复合物的速度很快。 ②整个反应速度取决于酶底物复合物释放出游离酶和形成产物的反应速度。 影响酶促反应的因素 1.底物浓度[S] 2.酶浓度[E] 3.pH对反应速度的影响 ?pH对酶活力的影响主要表现在以下几个方面： ?1）可以使酶的空间结构破坏 ?2）影响酶活性部位催化基团的解离状态 ?3）影响酶活性部位结合基团的解离状态 ?4）影响了底物的解离状态 8.竞争性抑制作用（Competitive inhibition） ?抑制剂具有与底物类似的结构，可与酶的活性中心，与底物竞争，阻止底物与酶的结合，降低酶反应速度。可以通过增加底物浓度而解除这种抑制作用。 （2）非竞争性抑制 底物和抑制剂可以同时与酶结合，但是，中间产物ESI不能进一步分解为产物，因此，酶的活性降低。 ?抑制剂与酶活性中的以外的基团结合，其结构可能与底物无关。 ?不能通过增加底物的浓度的办法来消除非竞争性抑制作用 ?某些重金属离 9.有无抑制剂存在Vmax和K 酶活力是指在一定条件下，酶所催化的反应速度。酶的活力越大，反应速度越高。我们知道，酶催化反应速度，用单位时间内底物的减少量或产物的增加量表示： 11.酶的分离纯化 一般酶的纯化步骤包括预处理与酶抽提、粗分离、细分离、酶结晶等。 酶固定化 固定化酶的研究始于20世纪50年代，1953年德国的Grubhofer和schleith采用聚氨基苯乙烯树脂为载体，经重氮化活化后，分别与羧肽酶、淀粉酶、胃蛋白酶、核糖核酸酶等结合，而制成固定化酶。 ?1969年，日本的千烟一郎首次在工业生产规模应用固定化氨基酰化酶从DL-氨基酸连续生产L-氨基酸，实现了酶应用史上的一大突破。 ?此后，固定化技术迅速发展，促使酶工程作为一个独立的学科从发酵工程中脱颖而出。 固定化方法 将酶与水不溶性的载体结合，制备固定化酶的过程称为酶的固定化。 ?固定在载体上并在一定的空间范围内进行催化反应的酶称为固定化酶。 ?酶的固定化方法归纳起来分为三类：吸附法、结合法和包埋法。 酶在