降血糖药物筛选方法__培训课件.pptVIP

* * * * * * * * * * * * * * * * * * * 1. 3T3-L1脂肪细胞葡萄糖消耗实验 脂肪细胞 11mM葡萄糖 含药培养液 培养24或48 h 检测培养液中 葡萄糖消耗量 葡萄糖氧化酶法 计算葡萄糖 消耗量 阳性药物可选择二甲双胍 糖消耗量(mM)=11mM-培养基葡萄糖浓度(mM) 2. 3T3-L1脂肪细胞葡萄糖转运实验 脂肪细胞 加药 培养24h 0.5 uCi/ml 2-deoxy-[H ]-D-glucose 3 孵育10min 加NaOH 裂解细胞 细胞 裂解液 KRP 缓冲液 清洗3次 [H ] 含量 同位素 测定仪 KRP缓冲液组成：131.2 mM NaCl，4.7 mMKCl，2.47 mM CaCl2， 1.24 mM MgSO4, 2.48 mM NaH2PO4, 10 mM HEPES 3 b-细胞损伤模型 H2O2 链脲霉素 四氧嘧啶 b-细胞胰岛素分泌模型 b-细胞ATP敏感钾通道阻断剂 四、分子水平降糖药物筛选 4.1 a-糖苷酶抑制剂筛选 原理： 饮食中淀粉和蔗糖(双糖)不能直接被肠壁细胞吸收，需要在小肠绒毛上的多种α-葡糖苷酶