基因工程技术概述.docVIP

基因工程技术 绪论 1 基因工程： 在体外对不同生物的遗传物质（基因）进行剪切、重组、连接，然后插入到载体分子中（细菌质粒、病毒或噬菌体DNA)，转入微生物、植物或动物细胞内进行无性繁殖，并表达出基因产物。 2基因工程要素：包括外源DNA；载体分子、工具酶和受体细胞等。 3基因工程的研究内容： （1）目的基因的获取： 从复杂的生物基因组中，经过酶切消化或PCR扩增等步骤，分离出带有目的基因的DNA片断。 （2）重组体的制备：将目的基因的DNA片断插入到能自我复制并带有选择性标记（抗菌素抗性）的载体分子上。 （3）重组体的转化：将重组体（载体）转入适当的受体细胞中。 （4）重组体的培养: 对转入重组子的受体细胞进行培养,以扩增DNA重组子或使其整合到受体细胞的基因组中。 ( 5 ）克隆的鉴定：挑选转化成功的细胞克隆（含有目的基因） 目的基因的表达：使导入寄主细胞的目的基因表达出我们所需要的基因产物。 第二章 基因工程的酶学基础 第一节 限制性核酸内切酶 一、限制性核酸内切酶：是一类能够识别双链DNA分子中的某种特定核苷酸序列，并由此处切割DNA双链的核酸内切酶。 来源：主要来源于原核生物 性质：内切酶，即在DNA分子内部制造切口的酶 功能：自我保护 细菌的限制修饰系统：限制，将侵入细菌的外援DNA进行分解形成小片段；修饰，细菌自身的DNA碱基被甲基化酶甲基化修饰所保护，不