【2017年整理】第一部分 基因工程实验技术.docVIP

第一部分 基因工程实验技术 总论 基因是遗传的基本单位，所以基因工程有时称遗传工程(genetic engnineermg)，有时还称为基因克隆(gene cloning)、分子克隆(molecular cloning)。基因工程的基本技术是DNA重组技术(recombinant DNA technigue)，其定义是在分子水平上，用人工方法提取(或合成)不同生物的遗传物质，在体外叨割、拼接和重新组合，然后将体外重组的DNA分子引入受体细胞，使外源DNA在受体细胞中进行复制与表达。按人们的需要生产不同的产物或定向地创造生物的新性状，并使之稳定地遗传给后代。了解这个概念要注意两个问题，第一就是必须有体外DNA的切割、连接、重组过程。第二，DNA重组必须是有目的的，按事先设计的过程进行， 随意的切割、连接、重组过程不是基因工程。 一、DNA体外重组的主要步骤 DNA体外重组可分五个步骡。 (一)目的基因和载体基因的制备 制备带有目的基因的DNA片段和载体基因。 1．带有目的基因的DNA片段的获得 带有目的基因的DNA片段的获得。主要有两个途径：是从已有的生物基因组中分离；是用酶学或化学的方法合成。 从生物基因组中分离DNA片段主要是提取基因组DNA，对3《进行酶切，获得特定的酶切片段。 酶学合成目的基因DNA片段通常是以mRNA为模板，用反转录酶合成其cDNA