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第九章 工业微生物原生质体育种和原生质体融合育种 原生质体育种 微生物原生质体融合育种 细菌原生质体融合育种 放线菌原生质体融合育种 酵母菌原生质体融合育种 霉菌原生质体融合育种 一、微生物原生质体再生育种 1．原生质体再生育种的一般程序 ： 出发菌株的选择→菌种活化和预培养→原生质体制备→原生质体再生→高产菌株分离（初筛）→复筛→遗传稳定性鉴定→菌种特性及发酵特性研究。 2．原生质体再生育种实例 小单孢菌福堤霉素 二、微生物原生质体诱变育种 （一）原生质体诱变育种方法 1．物理诱变剂诱变原生质体的一般程序： 取10 ml对数生长期微生物培养物，离心收集菌体，无菌水洗涤→离心，菌体沉淀物用酶液悬浮，水解去壁制成原生质体→离心，高渗溶液洗涤原生质体→原生质体悬浮液稀释至一定密度，取适量放入无菌培养皿内→将培养皿移至紫外灯下诱变处理→置暗处后处理一定时间→移入再生培养基中再生培养（由于原生质体较脆弱，用双层平板法再生）→分离优质菌株→突变株稳定性试验→突变株鉴定。 2．化学诱变剂诱变原生质体的一般程序 通常操作程序包括：出发菌株培养和原生质体制备及再生→选择合适的化学诱变剂，配制成合适的浓度→加入原生质体悬浮液，混合（含有高渗溶液，稳定原生质体）→诱变处理→离心弃诱变剂、原生质体沉淀用稳定液洗涤→稀释、分离到再生平板上（双层平板法）→再