HPLC法测定恒古骨伤愈片中橙皮苷的含量.docVIP

HPLC法测定恒古骨伤愈片中橙皮苷的含量 【摘要】? 目的 建立恒古骨伤愈片中橙皮苷含量的检测方法。方法 采用高效液相色谱法,Shim-pack-C18色谱柱(150 mm×4.6 mm,5 μm),以乙腈-0.4%磷酸水(20∶80)为流动相,检测波长283 nm。结果 橙皮苷线性范围为0.194～0.970 μg,r＝0.999 9,橙皮苷的平均回收率为98.50%,RSD＝0.63%。结论 该方法用于测定恒古骨伤愈片中橙皮苷的含量,具有简便、准确、灵敏的特点,可作为该制剂质量控制的指标。 【关键词】? 恒古骨伤愈片；橙皮苷；高效液相色谱法；含量测定 ??? Abstract：Objective To determine the content of Hesperidin in Henggu Gushangyu Tablets by high performance liquid chromatography. Methods The determination was conducted on Shim-pack-C18 column (150 mm×4.6 mm, 5 μm) with mobile phase of acetonitrile-0.4% phosphoric acid water (20∶80). The detection wavelength was 283 nm. Results Good linear relationship of Hesperidin between area and amount was noted for 0.194～0.970 μg, with a correlation coefficient of 0.999 9. The average recovery was 98.50%, and RSD was 0.63%. Conclusion The established method is simple, accurate and sensitive, and can be applied to the quality control of the preparation. ??? Key words：Henggu Gushangyu Tablets；Hesperidin；HPLC；content determination???? 恒古骨伤愈片是由中成药恒古骨伤愈合剂(收载于《国家中成药标准汇编 骨伤科分册》)改变剂型而制成的新制剂[1],药味由陈皮、红花、三七等9味中药组成,具有活血益气、补肝肾、接骨续筋、消肿止痛、促进骨折愈合的功效,用于新鲜骨折及陈旧骨折、股骨头坏死、骨关节病、腰椎间盘突出症等。为控制本品的质量,本试验采用高效液相色谱(HPLC)法测定了恒古骨伤愈片中橙皮苷的含量,作为其内在质量控制指标之一。 　　1? 仪器与试药 　　日本岛津LC-10 AT高效液相色谱仪；SPD-10A紫外检测器；KQ-250型超声波处理器。 　　橙皮苷对照品购于中国药品生物制品检定所(批号1107221-200211,HPLC面积归一化法,测定含量为99.99%)；恒古骨伤愈片由吉林万德制药有限公司提供(批200804032008050220080504,20080506,2008057)。其他所用化学试剂均为国产AR级。 　　2? 方法与结果 　　2.1? 色谱条件 ??? 色谱柱：Shim-pack-C18(4.6 mm×150 mm,5 μm)；流动相为乙腈-0.4%磷酸水(20∶80)；流速：1 mL/min；紫外检测波长：283 nm；理论塔板数按大黄素计算不低于5 000；柱温为室温[2]。 　　2.2? 对照品溶液的制备 ??? 精密称取橙皮苷对照品适量,加甲醇制成每1 mL约含0.05 mg的溶液,即对照品溶液。 　　2.3? 供试品溶液的制备 ??? 取本品20片,研细,取约0.3 g,精密称定,置具塞锥形瓶中,精密加入甲醇25 mL,称定重量,超声提取(功率180 W、频率60 kHz)30 min,取出,放冷,再称定重量,加甲醇补足减失的重量,摇匀,用微孔滤膜(0.45 μm)滤过,即得。 　　2.4? 阴性对照溶液的制备 　　按处方量制备不含陈皮药材的阴性样品,按供试品溶液的制备方法制备阴性对照溶液。分别精密吸取对照品溶液、供试品溶液、阴性对照溶液各10 μL,注入液相色谱仪中,按上述色谱条件测定。结果表明,阴性对照溶液色谱图中与对照品相应位置处无干扰,此法可行(见图1)。 　　2.5? 线性关系考察?? 　　精密称取橙皮苷对照品适量,加