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* 5－溴尿嘧啶(5－BU)、5－氟尿嘧啶(5－FU)、2－氨基腺嘌呤(2－AP),由于其结构与正常的碱基相似，进入细胞能替代正常的碱基参入到DNA链中而干扰DNA复制合成。 * * 生物学方法 1. 花粉植株的无性系变异 2. 胚胎挽救 3. 原生质体融合（离体受精） 4. 农杆菌介导的基因重组 5. T-DNA插入建立突变体库 花粉植株的无性系变异 花粉植株可以从游离的花粉或花药离体培养获得。 从理论上讲，花粉植株应为单倍体，但实际上许多植物的花粉植株中有一部分染色体数目发生变化，主要是染色体倍性的增加，包括二倍体、多倍体和混倍体。 * 1973 Cohen Boyer The Gene Pool becomes a Gene Ocean Any organism on earth is a source for genes for use by breeders Recombinant DNA Technology is one of the most powerful tools ever invented. * Gene Splicing T-DNA插入突变体库 农杆菌介导的遗传转化能够把T-DNA序列随机地、稳定地整合（插入）到植物基因组中。 如果插入位点是一个功能基因，就能造成基因的插入突变，在整个基因组中，就有可能使所有的插入基因都被破坏。 Electron micrograph of Agrobacterium tumefaciens infecting plant cell University College Worcester, UK * * 离体条件下，可以通过自发变异与人工诱变获得大量的突变个体，但只有通过认真地筛选才能获得可以利用的新的种质资源。 10.3 植物离体培养物突变体的筛选 Selection of variants in culture * 体细胞突变体的筛选 指通过不同手段，从体细胞无性系变异中筛选出优良的可供人们利用的个体或品系。 体细胞突变体筛选的方法 再生植株水平上的选择 可以直接通过田间实验筛选我们所需要的农艺性状，如早熟，品质好，丰产，花瓣、子粒色泽等，缺点是周期长，效率低。 细胞或组织水平上的选择 在培养基中加入选择压力直接选出突变体，适于抗性突变体的筛选。 * 选择时应考虑以下方面 所选的性状是单基因还是多基因控制； 能否保证细胞水平与整株水平的一致，能否稳定遗传； 除突变性状外，能否保持母体其它优良性状. * 细胞水平或组织水平的筛选 直接选择法 外植体水平上进行选择，再通过离体培养获得突变体 间接选择法 负接择系统 正选择系统 一步选择法 多步选择法 * 直接选择法 在一定的选择压力下，使新的突变型能优先生长，或使突变体能与野生型明显区别开，从而把突变体分离出来。 间接选择法 借助与突变型有某种相关的特性作为间接选择指标的筛选方法 用病菌毒素类似物可以选择抗病植株。 * * 直接选择法 负接择系统 正选择系统 一步选择法 多步选择法 正选择系统 在培养基中加入某种对正常细胞有毒的化学物质，突变细胞能正常优先生长，野生型细胞不能生长或生长受到抑制，从而把突变体筛选出来的方法。一般用于筛选抗性突变体。 * 一步选择法 如果加入培养基的选择剂的剂量较高，可以一次性地抑制或杀死所需突变体以外的其他细胞 ，适用于单基因控制的性状。 多步选择法 若开始时加入培养基的选择剂剂量较低，然后依次增加选择剂的浓度，进行第二轮、第三轮的筛选，最后得到抗性细胞 。 适用于选择遗传背景不清或是多基因控制的性状。 * 负选择法 ：用特定的培养基使突变体细胞处于不能生长状态，而正常型的野生型 细胞则可以正常生长，然后用一种能促使生长中的细胞中毒死亡的选择剂淘汰这些细胞，最后使突变细胞恢复生长并分离出来。 一定条件下 生长受到抑制 的突变细胞 杀死正常生长的细胞 生长受到抑制的 突变体细胞存活 突变细胞 恢复生长 主要用于分离营养缺陷型突变体和温度敏感型突变体。 * 温度敏感型突变体的筛选 一般植物细胞生长温度是20~30℃，温度敏感型突变体是放在高温28 ℃下不长，而在低温下23 ℃生长的生