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内皮型一氧化氮合酶转基因治疗心血管疾病研究现状 　作者：红梅 付军 迟宝荣 作者单位：(吉林大学第一医院，吉林 长春 130021) 　　【关键词】 内皮型一氧化氮合酶;一氧化氮;基因转移;基因治疗;心血管疾病 　　研究证明许多心血管疾病如动脉粥样硬化(AS)、血管再狭窄、高血压、冠心病、脑血管疾病等的发生发展与一氧化氮合酶/一氧化氮(NOS/NO)的功能异常有着密切关系〔1〕。因此，重建NOS/NO系统功能成为治疗心血管疾病的策略之一。但直接给予NO因半衰期短、易产生耐受性、副作用明显等使其在临床应用受到限制。NOS基因转移无疑为解决这一难题提供了新的思路和方法。NOS有3种同工酶，尽管均可产生NO，但其产生条件、作用靶器官和所发挥的作用仍有所侧重。因为内皮型一氧化氮合酶(eNOS)在血管壁中起着重要作用，学者将eNOS作为心血管疾病基因治疗的首选酶〔1〕，本文就eNOS转基因治疗心脏及血管疾病的研究现状作一综述。 　　1 NO及eNOS 　　NO是由L精氨酸经NOS催化产生。人类NOS有三个亚型，即神经元型(nNOS)、诱导型(iNOS)、内皮型eNOS，eNOS 和nNOS主要存在于内皮细胞和神经元，是Ca2+/钙调蛋白(CaM)依赖性的酶;iNOS由巨噬细胞等多种细胞产生，是Ca2+/CaM非依赖性的酶〔1〕。在生理水平，eNOS和nNOS保持着低程度的活化度，维持着内环境自稳，而iNOS能诱导产生大量NO，这常常会导致病理损伤〔2〕。在内皮细胞eNOS通过催化产生NO起到抑制血小板聚集、血小板和单核细胞血管内皮黏附、血管平滑肌细胞增生、低密度脂蛋白氧化、黏附分子表达和内皮素生产等多种调节作用影响心血管稳态〔1〕。体内eNOS受遗传和环境因素的调节，其活性需多种因素的参与和调控，如L精氨酸、辅助因子四氢生物喋呤(BH4)、烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADPH)、CaM、G蛋白偶联受体、热休克蛋白90、小窝蛋白、一氧化氮合酶相互作用蛋白、发动蛋白2、磷酸化和去磷酸化以及阴离子磷脂等因素的调节〔1〕。在多种心血管疾病eNOS基因表达发生改变〔3〕，导致NOS/NO系统，因此，通过eNOS转基因技术恢复NO的生成,无疑对心血管疾病的治疗具有重要意义。 　　2 动脉粥样硬化(AS) 　　NO发挥多种血管保护作用，包括血管舒张，抑制血小板聚集和内皮细胞黏附，抑制平滑肌细胞增殖等〔1〕。MujynyaLudunge等〔4〕给具有AS倾向的载脂蛋白E缺陷(ApoE(/)型小鼠转移腺病毒介导的eNOS基因，可修复受损颈动脉内皮依赖性血管舒张功能，转染5 w后病损面积减少，内膜/中膜比值降低，巨噬细胞浸润减少，有效抑制了血管病变的形成和发展。Hayashi等〔5〕对AS家兔进行eNOS基因转移，7 d后AS病变消退。Tanner〔6〕等研究人AS颈动脉体外转移eNOS基因是否能增强NO产生，用非AS人胸廓内动脉及大鼠主动脉作对照，结果颈动脉髙效表达eNOS蛋白，但不增加NO释放，相反，eNOS基因增强非AS动脉NO产量，而且发现eNOS基因转移的颈动脉钙依赖性eNOS活性极低，与对照组比较无明显差异，各组间BH4浓度也无差别。补充各种辅助因子及超氧化物歧化酶、PEG过氧化氢酶等均未改变NO释放量。提示eNOS基因虽然在人AS颈动脉得到高表达，但其活性并未增加，而这种缺陷既不是由辅助因子缺乏造成，也不是因NO代谢增强所致。所以，有充分的理由将这种差别解释为在不同的动物模型和人体组织、以及不同性别、不同程度和/或不同发病机制造成的AS会导致重组eNOS蛋白的活性不同，表明转基因在人体不同组织可能产生意想不到的结果，因此，在开始临床试验之前，应该完成相关组织的体外研究。 　　3 血管再狭窄 　　移植静脉再狭窄是影响冠状动脉旁路移植术(CABG)后远期疗效的主要因素。许多研究表明，CABG术后血管桥再狭窄的发生与NO的功能异常相关。移植血管再狭窄主要是由于血管平滑肌细胞过度增生和凋亡失去平衡，形成新内膜和不断发展的血管粥样硬化所致。移植血管转染eNOS基因通过抑制血管平滑肌细胞增生，促进其凋亡，使移植静脉内膜和中膜增生减轻，从而能有效防治移植血管再狭窄〔7～9〕。 　　李铁岭等〔7〕制作自体颈静脉腹主动脉移植大鼠模型，移植前分别将血管浸泡于携带eNOS基因的腺病毒溶液和腺病毒空载体溶液。移植术后2 w取出血管发现eNOS转染组内膜厚度、管腔狭窄度、内膜血管平滑肌细胞数及PCNA阳性表达均较对照组明显减小或减少，而eNOS mRNA表达则明显增加。陶登顺等〔8〕的同类研究进一步证明移植血管内膜/中膜厚度比值也减少。陶登顺等〔9〕通过腺病毒介导的人类