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分子生物学复习资料 DNA的生物合成 1、酶学基础 A 超螺旋构象变化及与解链有关的酶和蛋白 a. 拓扑异构酶II型 (引入负超螺旋) Ⅱ型酶（Topoisomerase II）由ATP的水解提供能量，在DNA的双链上产生切口， 使另外一条双链DNA得以穿过 。 原核：gyrase （促旋酶Gyrase）利用ATP水解提供能量，向DNA分子引入负超 螺旋，从而抵消DNA复制中产生的正超螺旋。 真核：TopoⅡ *Topoisomerase I:在DNA的一股链上产生一个切 口，使另一条链得以穿越 。 b. 解链酶 helicase(打开DNA双链) 催化DNA双螺旋解链, 具有解链的极性和移位酶活性。 原核：DnaB (5’ ?3’)六聚体 ATPase Rep (3’ ?5’) 单体，UvrD 真核：与pol ?共纯化因子(5’ ?3’) 与pol ?共纯化因子(3’ ?5’) c. 单链DNA结合蛋白 (保持单链状态) 原核：单链结合蛋白SSB (single strand binding protein) 真核：复制蛋白A RPA /复制因子A RF-A B 引发酶（primase） 作用: 合成RNA引物 E. coli : DnaG 基因编码，是一种特殊的RNA聚合酶，其引发活性依赖于 DnaB(解链酶)蛋白。 真核生物： pol ?的p49 p58亚基具有引发酶的活性。 C DNA聚合酶（DNA polymerase） 主要用于复制的DNA聚合酶：原核: DNA聚合酶 III 真核: pol ( RNA引物的合成) pol ?/ pol ε (DNA的复制) PCNA (滑动钳) RFC (钳载复合物) 原核a. DNA聚合酶I 大片段（klenow片段）： 5’?3’聚合酶活性(中等) 3’?5’ 外切酶活性(校对) 小片段：5’?3’外切酶活性(切RNA引物) 主要生物学功能：除去RNA引物时，后滞链的修 复；DNA损伤的修复。 应用：缺口翻译 DNA聚合酶 I不是DNA复制的主要聚合酶 *1969年，Paula Delucia和John Cairns分离得到的 E.coli 突变菌株polA-，其DNA pol的活性只有正 常菌株的1%，但是仍然可以正常分裂。 DNA pol I的聚合反应速度为103base/min， 原 核生物实际的复制速度为105 base/min。 DNA pol I的进行性（processivity）不高。 b. DNA聚合酶II 5’?3’聚合酶活性 ； 3’?5’ 外切酶活性 生物学功能： 与DNA聚合酶 I 类似 ，可能在DNA损伤修复中起作用。 c. DNA聚合酶III 多亚基组成 ，5’?3’聚合酶活性（1000Nt/s），3’?5’ 外切酶活性 主要生物学功能：DNA复制所必需 1 核心酶: 包含主要的酶活性 2 钳载复合物 3 滑动钳: 提高酶持续合成的能力 processivity 50Kb τ亚基二聚化 合成速度：体内1000nt/s 体外700nt/s 聚合酶III的校对功能 1碱基错配，polIII停顿。 2错配碱基移动到外切酶活性中心，被 切除。 3继续DNA合成 DNA聚合酶Ⅲ的组装 后随链的合成需要β滑