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武汉大学药学实验教学中心 武汉大学药学实验教学中心 实验七、气相色谱法测定维生素E软胶囊含量 ----武汉大学药学院 2014年4月 实验目的 1 实验原理 2 实验方法与指导 3 注意事项 4 思考题 5 * 一、实验目的 1．掌握气相色谱法的基本原理与常用定量方法。 2．掌握中国药典采用气相色谱法定量控制药品质量的 基本要求。 3．掌握胶囊剂含量测定的操作方法和计算方法。 * 一、中心建设简况 （一）气相色谱法的基本原理 二、实验原理 载气源 进样口 色谱柱 数据处理 检测器 样品 二、实验原理 1．色谱柱 （一）气相色谱法的基本原理 色谱柱类型 材质 内径 柱长 固定液 毛细管柱 玻璃 石英 0.25mm 0.32mm 0.53mm 5~60m 甲基聚硅氧烷; 不同比例组成的苯基甲基聚硅氧烷、聚乙二醇等 填充柱 玻璃 不锈钢 2~4mm 2~4m 甲基聚硅氧烷、聚乙二醇等。 * 二、实验原理 （一）气相色谱法的基本原理 2．载气 两级减压阀 开关阀 用作流动相的载气有氮气、氦气和氢气。根据供试品性质和检测器种类选择载气，除另有规定外，常用的载气为氮气。对于填充柱一般流速为30～60ml/min。 * 3. 检测器 二、实验原理 （一）气相色谱法的基本原理 最常用的是FID。其以氢气为燃气，空气为助燃气。检测器温度一般应高于柱温，并不得低于150?C，以免水气凝结，通常检测器温度为250～350?C。 检测器种类 简称 特点 氢火焰离子化检测器 FID 对碳氢化合物有良好响应，适合检测大多数药物 氮磷检测器 NPD 对含氮、磷元素的化合物有很高的灵敏度 火焰光度检测器 FPD 对含磷、硫元素的化合物灵敏度高 电子捕获检测器 ECD 适合于含卤素的化合物 质谱检测器 MSD 能给出供试品中某个成分相应的结构信息，可用于结构确证 热导检测器 TCD 可用于水分等测定 * 二、实验原理 4.进样方式 （一）气相色谱法的基本原理 溶液直接进样： 进样口温度应高于柱温30~50℃；进样量一般不超过数微升；柱径越细，进样量应越少，采用毛细管柱时，一般应分流以免过载。 顶空进样： 适合固体和液体供试品中挥发性组分的分离和测定，气体进样体积一般为1 ml。为使待测物完全气化，进样室（也称气化室）温度一般需高于被测组分沸点，高于柱温约30～50?C。 * （二）含量测定与系统适用性试验 含量测定 GC测定方法 内标校正因子法 内标一点法 外标一点法 标准溶液加入法 * 二、实验原理 （二）含量测定与系统适用性试验 系统适用性实验 要求： 为达到系统适用性试验要求，可改变色谱柱内径、长度、载体牌号、粒度、固定液涂布浓度、载气流速、柱温、进样量、检测器的灵敏度等。但不得任意改变检测器种类、固定液品种及特殊指定的色谱柱材料。 * 二、实验原理 ※ 1.色谱条件 三、实验方法与指导 6890N：HP-1（0.25 μm×0.25 mm×30 m） 柱 温: 275℃ 进样口：295 ℃ 检测器：295 ℃ FID 载气流速：1.8 ml/min 岛津1：HP-1（0.25 μm×0.25mm×30m） 柱 温: 275℃ 载气流速：1.8 ml/min 进样口：295 ℃ 检测器： 295 ℃ FID 岛津2：DB-1（0.25 μm×0.25mm×30m） 柱 温: 285℃ 载气流速：1.8 ml/min 进样口：295 ℃ 检测器： 295 ℃ FID 进样：手动进样，不分流， 0.6 μl 根据系统适用性试验的结果，确定以下色谱条件： * 三、实验教学改革思路及方案 ※ 2.溶液配制 内标溶液：取正三十二烷适量，加正己烷溶解并稀释成每 1ml中含1.0 mg的溶液（50mg→50ml，两组共用）。 (2)对照品溶液：取维生素E对照品约20 mg，精密称定，置 10ml 棕色量瓶中，精密加内标溶液10ml使溶解，进样。 (3)供试品溶液：取本品20粒，精密称重（M)，剪小口将内容物挤出至一干净、干燥烧杯内，避光保存，胶囊壳留好（不得损失）备处理。取内容物适量（约相当于Vit E 20mg)，精密称定，置 10ml 棕色量瓶中，精密加内标溶液10ml使溶解，静置，