利用木糖生产乙醇菌株的筛选与鉴定.docVIP

发酵木糖生产乙醇菌株的筛选与鉴定 胡海军 梁运祥 葛向阳* （华中农业大学 农业部微生物学国家重点实验室 发酵工程研究室，武汉 430070） 摘要：从花圃土和腐朽树皮中各筛选得到一株可以发酵木糖产生乙醇的菌株。乙醇产量分别可达到6.98g/L和6.05g/L。经过18S rDNA同源性的分析，菌株3鉴定为间型假丝酵母（Candida intermedia），而菌株621则为热带假丝酵母（Candida tropicalis）。对其发酵木糖、葡萄糖和混合糖的产物蒸馏后用气相色谱分析，主产物为乙醇，纯度高，副产物少。两菌株为下一步的菌种基因改造工作提供了研究基础。 关键词：木糖；乙醇；中型假丝酵母；热带假丝酵母 中图分类号： 文献标识码：文章编号： Strains Collection for Produce Ethanol by Xylose-Fermening Haijun Hu, Yunxiang Liang, Xiangyang Ge* (Fermentation Engineering Research Laboratory, State Key Laboratory of Agricultural Microbiology, Huazhong Agricultural University, Wuhan 430070, P.R. China) Abstract : Two strains of yeast respectively isolated from garden soil and rotten cortex could effectively produce ethanol from xylose in 6.98 g/L and 6.05 g/L yield. Through 18S rDNA sequence analysis, one strain No.3 is characterized as Candida intermedia and the other strain No. 621 shows highly identical with Candida tropicalis. Results of Gas Chromatography analysis to the distilled products fermented from xylose, glucose or mixture of them，showed these two strains have high efficiency production of ethanol in all of them，which could be used as orginal strains for further genic alteration work. Keyword: Xylose; Ethanol; Candida intermedia; Candida tropicalis 前言 石油储备与消耗的现状，迫使人们寻找乙醇作为替代品。为了避免粮食与燃料之争，乙醇发酵的原料逐渐转向了以农林业废弃物为主的纤维质原料。这些农林业废弃物资源丰富，是变废为宝的可再生性原料。 纤维质原料主要由纤维素、半纤维素和木质素等组成。通过生物、物理化学等单一或联合的方法进行逐步的降解[1]。纤维素的降解产物中六碳糖（葡萄糖、半乳糖和甘露糖）约占2/3，五碳糖（D-木糖和L-阿拉伯糖）约占1/3。而半纤维素的水解产物中D-木糖高达90%[2]。众所周知，六碳糖可通过酿酒酵母Saccharomyse cerevisiae等发酵产生乙醇。而五碳糖的利用，则成为纤维质原料转变成为可利用性能源的关键问题。为了发酵D-木糖，人们试图从自然界中寻找微生物资源，目前已筛选到毕赤酵母Pichia stipitis、丝孢酵母Trichosporon sp.、管囊酵母Pachysolen tannophilus[3]和耐热甲基营养酵母Hansenula polymorpha[4]等微生物。 其中P. stipitis NRRL Y-7124木糖发酵的研究最为广泛和深入，已经成功地用于发酵麦秸和水葫芦等纤维质原料生产乙醇[5、6]。P. stipitis的全基因组已经被测定，与木糖代谢的有关基因已经被克隆并导入到S. cerevisiae中，用于工程菌的构建[7]。并且对S. cerevisiae 424A工程菌株的生长动力学和在不同培养基上的乙醇产率等进行了详细的阐述[8]。工程菌株S. cerevisiae 259ST还被运用于处理亚硫酸纸浆废液生产乙醇[9]。同时也有用大肠杆菌Escherichia coli KO11构建重组菌株来进行木糖发酵的研究[10]。为