茎尖脱毒与快繁终稿.pptVIP

实验七、马铃薯茎尖培养脱出植物病毒 　 [原理] 马铃薯（或大蒜）等无性繁殖植物由于长期无性繁殖，病毒病较重，从而造成品种退化，产量和品质大幅度的下降。通过热处理和茎尖培养可以脱去病毒全部或部分病毒。在无菌条件下剥取小于0.3mm的茎尖生长点进行组织培养成苗后，基本可以达到脱去病毒的作用，从而恢复产量及品种特性。 [仪器与用具] 光照培养箱、超净工作台、镊子、酒精灯、棉球、三角瓶、培养皿、解剖刀、解剖针、解剖镜 [材料与试剂] 1材料：马铃薯块茎、或大蒜鳞茎， 2试剂MS各种母液、6-BA、NAA、GA3、酒精、升汞、蔗糖。 [方法步骤] 1、将表面光滑的马铃薯切块，埋在湿润的沙土中在室温下催芽。 2、待芽长至2cm时，将发芽块茎放入37℃的光照培养箱，光照时间12h/d，处理时间28d左右。 3、剪取经过热处理的发芽块茎的茎尖1~2cm，自来水冲洗0.5h，剥去外面的叶片。在超净工作台上进行严格的消毒。 4、用75%的酒精浸15s，无菌水冲洗2次，再用0.1%的升汞浸泡8~10min，无菌水冲洗3~5次，每次冲5min，放在灭过菌的培养皿中待用。 5、在超净台上，把装有已消毒茎尖的培养皿放在解剖镜下，仔细剥离，直到出现圆滑生长点时，用灭过菌的解剖针切取0.1~0.5mm带1~2个叶原基的茎尖，接种于培养基上。培养基为：MS+GA3 0.1+NAA 0.1+6-BA 0.5+蔗糖3%+琼脂0.6%。 6、将接种好的茎尖移到培养室中，于25℃、3000 lx培养，大约5~7d茎尖转绿，40~50d成苗。 7、病毒检测。主要用ELISA或指示植物方法鉴定。 8、在无菌条件下，将试管苗切割成带一腋芽的茎段，接种在培养基：MS+6-BA 1.0+蔗糖3%+琼脂0.6%上成苗和快繁。之后进行炼苗移栽或进行试管微薯的培育。 作业 1、茎尖培养为什么能脱出植物病毒？ 2、常用的病毒植株的检测方法有哪些？ 3、如何提高茎尖培养脱毒效果？ 炼苗移栽 （1） 、当试管苗长高到3~4cm，具有5~7个浓绿色的小叶时进行移栽。在移栽前4~5d开盖炼苗，然后取出苗，洗净根部培养基，将其移入珍珠岩基质。移栽时用镊子将基质压割成1~2cm深的槽沟，覆上基质，用水浇湿，以便根部与土壤密接，易于成活。保持较高空气湿度，土壤不要过湿，光照应当充足，气温不宜超过30℃。 （2）、当植株高度达到10~15cm，具有5片左右完全展开浓绿的复叶时移入田间。 试管微薯的培育 （1）? 把经过检测不带病毒的小苗，切成带1~2个芽的茎段，转接于30ml快繁培养基上，每瓶接15~20株，待小苗长至10cm左右时，可以进行下次扩繁。快繁的液体培养基为：MS+6-BA 1.0+蔗糖3%。固体支撑物为脱脂棉。 （2） 在2000~3000 lx光下24h光照，25±1℃培养40d左右。 （3） 于试管苗10~15叶片，株高10~15cm时，在无菌条件下加入30ml的诱导微薯的培养基。诱导微薯的培养基为：MS+6-BA 5mg/L+SA 0.5mmol/L+12%蔗糖。 （4） 在黑暗条件下，15±3℃下，诱导试管微薯。 （5） 20d后，培养温度升高到25℃，每天光照2~3h，50d后采收微薯。 [思考题] 1、茎尖培养为什么能脱出植物病毒？ 2、常用的病毒植株的检测方法有哪些？ 3、影响微薯诱导的因素有哪些