植物细胞器的分离3预案.docVIP

植物细胞器的分离 一、叶绿体的分离： 1.实验原理： 采用差速离心法，利用不同颗粒的大小形状不同导致沉降速率不同，把叶绿体的颗粒沉降出来。 实验试剂： 成熟的猪笼草山梨醇、Tris、EDTA与β-巯基乙醇均为Amresco产品、 细胞器分离缓冲液:300 mmol/L山梨醇, 50mmol/L Tris-HCl(pH为8.0), 5 mmol/L EDTA(pH 8.0), 0.1%β-巯基乙醇(临用前加入)。 SG350C多功能食品料理机(上海天航电器有限公司) , GL21M高速冷冻离心机及配套的2号角转头(湘仪集团) 表 名称 使用浓度 配制体积 从母液吸取体积 母液浓度 称取g 实际g 母液体积 备注 山梨醇 0.3 mol/L 100ml 10ml 3mol/L 54.651 100mL Tris-HCl 0.05mol/L 0.05mol/L 100ml pH 8.0 EDTA 0.005 mol/L 100ml 1ml 0.5mol/L 14.6124 100mL pH 8.0 β-巯基乙醇 0.1% 100ml 100ml 0.1% 0.1 100ml 蔗糖 52% 100ml 100ml 52% 52 100ml 蔗糖 30% 100ml 100ml 30% 30 100ml EDTA 0.025 mol/L 10