咖啡因的含量的测定论文.docVIP

2011届攻读学士学位本科生毕业论文(设计) 测定氨咖黄敏片中对乙酰氨基酚和咖啡因的含量 学 院 中 药 学 院 学生姓名 代勤高 专 业 中药资源与开发 实习单位 曲靖药业有限公司 导师姓名 余鹏飞（执业药师） 二零一一年五月十四日 (40∶60)为流动相,流速为1.0mL/min, 柱温为室温，检测波长为216nm,进样体积为20μL等条件下进行测定。其结果为HPLC法 mg/mL ~0.7 mg/mL浓度范围内与峰面积呈良好的线性关系,r=0.9999；平均回收率=99.92%。咖啡因在0.018 mg/mL ~0.042 mg/mL浓度范围内与峰面积呈良好的线性关系,r=0.9998；平均回收率=99.74%。其结论为高效液相色谱法（HPLC法）不仅能使对乙酰氨基酚和咖啡因更好地分离开来,提高了检测的专属性和准确度,而且操作简单迅速、结果准确可靠、重复性、稳定性良好，适用于氨咖黄敏片中对乙酰氨基酚和咖啡因的含量测定。并且目前本法也被大多数制药企业应用于有效成分的分析与含量的测定。 关键词: 高效液相色谱法（HPLC法）[1]。咖啡因是一种甲基黄嘿吟，是中枢神经刺激剂。其药物学作用是影响大脑皮层、延髓和脊髓，刺激心肌，增加呼吸频率和深度，刺激肾上腺髓质释放肾上腺素，可兴奋大脑皮层,解除疲劳；并可使脑血管收缩,缓解脑血管扩张引起的头痛[2]等作用。在本品中起到主导的作用与功效，因此被确定为检测的对象。本品收载于国家药品标准[3]中。该标准中采用指示剂滴定法分别对对乙酰氨基酚和咖啡因的含量进行测定。其中对咖啡因含量采用加热回流提取后用外指示剂法滴定,操作繁琐，容易造成样品损失而使结果偏低；另外采用氯仿提取后滴定，毒性较大，挥发性强对实验工作者生命健康影响巨大；并且对滴定终点判断易受主观因素影响，测量误差较大[4-5]。而高效液相色谱法能很好的弥补这一些缺点和不足发挥他自己的优点。所以采用HPLC法同时对对乙酰氨基酚、咖啡因的含量进行测定。操作简便、快速、重现性良好，使其含量测定结果准确可靠更符合客观实际。[6-7] 1. 实验材料 1.1 实验仪器 岛津高效液相色谱仪LC－10ATVP泵； SIL－HTA自动进样器；SPD－M10AVP检测器；CLASS－VP色谱工作站；安捷伦1100高效液相色谱仪；BS－210S电子天平（北京赛多利斯天平有限公司）；HH.S－112型电热恒温水浴锅（江苏省医疗器械厂）（重庆川东化工有限公司 化学试剂厂）（重庆川东化工有限公司 化学试剂厂）051102、051107、051109、051110Diamonisal C18（200mm×4.6mm，5um）20μL，柱温为室温，检测波长为216nm。理论板数按对乙酰氨基酚峰计不少于5000，对乙酰氨基酚与咖啡因的分离度大于4。并在计算机上设置好各项参数。 3. 溶液配制 3.1 对照品溶液的制备　 精密称定105℃干燥至恒重的咖啡因对照品30mg，精密加乙醇50mL使溶解，精密量取5mL，置50mL量瓶中并精密加入105℃干燥至恒重的对乙酰氨基酚对照品50mg使溶解，加水稀释至刻度，即得浓度为每mL含对乙酰氨基酚1mg和咖啡因0.06mg的对照品贮备液。精密吸取上述溶液5mL置10mL量瓶中，加重蒸馏水稀释至刻度，摇匀，经0.45μm微孔滤膜滤过，作为对照品溶液。 3.2 供试品溶液的制备　 取氨咖黄敏片20片，研细，精密称取适量(约相当于对乙酰氨基酚200mg量)，置于25mL锥形瓶瓶中，加流动相使之溶解，滤过，精密量取过滤液5mL置于50mL容量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀，经0.45μm微孔滤膜滤过，即得。 3.3 阴性对照溶液的制备 取不含对乙酰氨基酚和咖啡因的空白样品，照供试品溶液制备方法制备，即得阴性对照溶液。 4. 实验方法的考察[] 4. 1 系统适应性试验 按上述色谱条件，分别吸取3.1、3.2、3.3项下溶液即对照品溶液、供试品溶液和阴性对照溶液各20μL注入色谱柱。采集色谱图（见a、b、c）。 a b c 氨咖黄敏片色谱图(图b、c中前锋为对乙酰氨基酚、后峰为咖啡因) 图a阴性对照溶液色谱图 图b对照品溶液色谱图 图c供试品溶液色谱图 由图a、b可知，阴性对照品色谱在对照品出峰位置上无干扰峰，即本试验条件下对测定干扰较小，系统误差较小。又由图b、c可知，对照品图谱对乙酰氨基酚峰(Rt=4.532分钟)；咖啡因峰(Rt=6.583分钟)。样品图谱对乙酰氨基酚峰(Rt=4.562分钟)；咖啡因峰(Rt=6.583分钟)，且他们的分离效果都良好。 4.2 线性关系考察（标准曲线的制作） 分别准确吸取浓度