癌症的基因诊断和反义核酸基因治疗治疗.pptVIP

* “癌症的基因诊断和反义核酸基因治疗治疗” 专题汇报 一、一般情况介绍 时间：9月11日——9月17日 地点：福建省血液病研究所 福建医科大学附属协和医院血液内科 学员来源：黑龙江 云南 江西 湖南 广东 南宁 福建 讲授方式 CAI 博导 + 博士 + 技术员 内容：理论和实验部分 理论部分：13个专题（讲座） 实验部分：8项内容（示范） 福建医科大学内科博士点 福建省“211工程”重点学科 福建省科委的优先发展研究所 福建省教委和福建省卫生厅的重点学科 国家药品监督管理局的临床药理基地 专业技术人员67人，教授6人，副高10人 国家级专家博导3人 硕导9人 62项科研成果（国际、国家、省部及省厅级） 培养博士22人 硕士45人 研究方向 癌症的基因诊断和基因治疗 细胞因子与造血调控 造血细胞培养与造血干细胞移植 福建省血液病研究所简介 1、反义核酸基因治疗癌症研究现状与展望 2、基因转移在肿瘤治疗中的应用 3、反义技术在体外净化中的应用 4、癌症Bcl-2基因 5、癌症的c-myc基因 诊断及反义核酸基因治疗 6、癌症MDR1基因 7、慢粒白血病bcr-abl融合基因的检测及基因治疗 8、寡脱氧核苷酸的合成及纯化 9、癌症基因缺损的测序诊断 10、核酶在癌症基因治疗中的应用 11、肽核酸在癌症治疗应用中进展 12、白血病细胞因子自分泌及其意义 13、裸鼠、Scid鼠肿瘤模型的建立及其应用 内容 理论 1、免疫组化 2、癌基因荧光定量PCR 3、癌细胞系的培养与保存技术 4、FCM 5、癌症基因缺损的测序诊断技术 6、基因药物反义核酸的纯化 7、动物模型的建立及 反义核酸治疗癌症动物实验技术 考试1.5小时 实验部分 现代科学证明 人类所有的疾病都与基因变异或受损有关 人类现有的18000种疾病 第一类单基因病 如 血友病、多指病 第二类多基因病 如癌症、糖尿病、 高血压、冠心病、哮喘病等 第三类获得性基因病 如病毒性肝炎 二、反义核酸基因治疗癌症研究现状与展望 基因:具有遗传效应的DNA片断 人类总基因15.3万个 3.8万已肯定 11.5万个可能 长度 为地球 太阳来回6次 基因组或称词典 20bp/second需11年读完 DNA由碱基互补的两条单链组成， 模板链称正义链 互补单链称反义链 反义核酸 人工合成一段与靶基因mRNA以 碱基互补结合，从而阻断其表达 的寡核苷酸序列 包括：反义DNA 反义RNA 核酶 Antisense Oligodeoxynucleotides AS-ODN 反义核酸作为基因治疗药物必须具备的条件 1、能进入靶细胞内，并有一定浓度 2、细胞内长半衰期 3、对抗细胞内、血浆和体液的核酶的降解 4、特异性识别靶细胞并稳定结合 5、能人工合成 6、使用安全有效 注意 1、AS-OND长度的优化选择 16-20bp最佳 2、AS-ODN进入靶细胞内的机制 蛋白受体介导的胞吞作用 AS-ODN带负电荷 3、AS-ODN的修饰和细胞内稳定性 甲基磷酸酯 硫代磷酸酯 肽核酸 H O P O O H H 碱基 H CH2 H O O H H 碱基 H CH2 H H O P O X- =O 1、新的化学物质——寡核苷酸 2、新的药物受体——mRNA 3、新的受体结合方式——碱基互补杂交 4、新的药物受体结合反应—— Rnase H介导的靶mRNA的降解 反义药物与传统药物的不同 特异性强 准确性高 应用前景广阔 组织分布 除脑以外的所有组织 主要为肾肝脾及骨髓 AS-PS-ODN Bcl-2 mRNA 抑制细胞凋亡 c-myc mRNA 细胞增殖和分化 c-myb mRNA (p75) 造血细胞增殖和分化 MDR1 mRNA (p170) 多药耐药 Bcr-abl mRNA (p210) 抗凋亡 反义核酸对肿瘤细胞株的作用 细胞株: HL-60 K562 U937 原代白血病细胞株: AML ALL APL CML等 反义核酸作用的靶基因: Bcl-2 c-myc c-fos c-syc MDR bcr-abl p53 反义药物对实体瘤动物模型的药效学研究 动物模型 MMP-2 PKC-a c-myc PKAI 端粒酶RNA C-raf-1 PKA