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第六章 染色体工程与分子育种 什么是染色体工程 按照人们预定目标，采用一定的方法和步骤，通 过染色体操纵改变生物染色体组成并 进而改变其遗传性的过程称为染色体工程。 染色体工程操纵的水平 染色体组水平 通过体细胞杂交进行 染色体水平 通过附加或代换进行 染色体片段水平 通过易位进行 染色体分离的基本原理 由于荧光染料Hoechst 只对A-T特异性染色，而染料Chromomycin只对G-C特异性染色。染色体上DNA的碱基序列是不同的，因此这些特异性染料和不同染色体上DNA结合的量和比例是不同的。结合这些染料后，再经激光照射，染色体就会呈现不同的荧光带。将特定染色体发出的荧光波长输入计算机，通过计算机控制就可将发出同一波长的染色体收集在一起，从而实现染色体的分离。 染色体微切割常用的两种方法 微细玻璃针切割法：采用特细的玻璃针（尖端直径约为0.17μm）在倒置 显微镜下对目的基因所在染色体区段进行切割与分离。 显微激光切割法：将染色体标本在底部贴有特殊薄膜的培养皿上制作，利用 激光共聚焦扫描显微系统，依靠高能量激光照射非选择 细胞或染色体，使其受热蒸发，最后只留下目的染色体。 人工染色体 人工染色体：人工组建的具有染色体功能的 DNA分子。 真核生物染色体三个最基本的组成元件：着丝粒(CEN)、自主复制序列(ARS)及 端粒(TEL)。 自主复制序列是染色体复制所必需的，着丝粒 是有丝分裂过程中纺锤丝所连接的那段DNA。端粒是保持细胞内线状染色体完整所必须的。 酵母人工染色体（YAC） 目前容量最大的克隆载体，1000kb 构建基因组文库和图谱的工具。 其它人工染色体 细菌人工染色体（BAC） 350kb 噬菌体人工染色体（PAC） 100kb 双元细菌人工染色体（BIBAC）：可直接转化 可转化人工染色体（TAC）： 可直接转化 哺乳动物人工染色体（MAC） 植物人工染色体（Plant Artificial chromosome） 染色体介导的基因转移技术 将同特定基因表达有关的染色体或染色体片段转入受体细胞，使该基因得以表达，并能在细胞分裂中一代又一代地传递下去。该技术称为染色体介导的基因转移技术，又称为染色体转导。 染色体转导技术两种方法 微细胞介导的基因转移法 微细胞制备----微细胞融合 染色体介导的基因转移法 染色体分离----染色体转移----受体细胞分离与鉴定 * 细胞分裂同步处理 染色体的荧光色素染色 染色体的分离 *
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