细胞融合与单克隆抗体学案.pptVIP

葡萄刺玫 * 柠檬柚，甜瓜是香瓜和哈密瓜的杂交 * 神经氨酸酶降解细胞膜糖蛋白 * 细胞融合前的准备（2） 制备饲养细胞（feeder cell）：小鼠腹腔巨噬细胞，能分泌生长因子促使单个细胞容易生长，还能清除死亡破碎细胞及微生物。 于细胞融合前一天，取SPF 级健康Balb/c 小鼠，处死，用75%酒精浸泡10 min，消毒小鼠体表。 将其移入超净工作台内，以仰卧位固定在解剖板上，用无菌注射器吸取10 ml1640液注射入腹腔，用酒精棉球轻揉腹部2～3 min；用无菌剪刀剪开腹部皮肤，暴露腹膜，吸出腹腔液，放入10 ml离心管，1 000 rpm，离心10 min，弃上清； 用5 ml HAT培养基重悬细胞，计数调整细胞数1×105/ml，接种于96孔细胞培养板，每孔100 μl，置于37℃、5% CO2培养箱中培养。 一般一只小鼠可获得5×106～8×106个饲养细胞，用于3块96孔板融合细胞培养。 细胞融合前的准备（3） 骨髓瘤细胞悬液的制备： 细胞融合前两周复苏小鼠骨髓瘤细胞SP2/0，待细胞生长稳定后，以终浓度为20 μg/mL 8-AZ完全培养液培养两周，筛选HGPRT缺陷型细胞。 融合前48 h将SP2/0 细胞进行传代培养，选取对数生长期的细胞，于融合前用新鲜培养液换液一次，融合当天收集细胞悬液，离心弃上清，用1640液洗涤一次，重悬于培养液