植物线粒体的制备及其呼吸耗氧的测定.pptVIP

植物线粒体的制备及其呼吸耗氧的测定 I 线粒体的制备 一. 原理 在接近生物材料自身的生理条件下（合适的pH、等渗或高渗浓度等），可采用分级离心方法将线粒体颗粒与其他细胞内含物在亚细胞水平上分开，然后在一定的离心力下收集线粒体。针对植物组织比较脆弱及其细胞含有较大量的有机酸等特点，不宜采取激烈的破碎方式，根据不同种类材料灵活掌握介质的pH。在介质中加入一些高分子化合物可除去酚类的干扰。为了去除其它细胞器的污染，获得纯净的线粒体，本实验采用蔗糖衬垫离心法进行提取。 二. 仪器设备 冰冻离心机、组织捣碎机 三. 材料及试剂 1. 材料：挑选籽粒饱满的绿豆种子20g，用沸水烫 后，均匀铺在带有湿润滤纸的培养皿中，37℃下黑暗 萌发3-4d。去掉种皮和胚根，用滤纸吸干表面水分， 备用。 2. 试剂 ① 提取及洗涤介质：50mmol/LTris-HCl 缓冲液内含 0.3mol/L甘露醇、0.2mol/L蔗糖、1mmol/L EDTA、 0.2mmol/L二硫苏糖醇和1mg/mL，pH 8.0； ②悬浮介质：除不加牛血清蛋白外，其余与提取介质 相同。 四. 实验步骤 线粒体的提取：称取10g去除种皮及胚根的绿豆幼苗放在4℃ 冰箱中饥饿1小时，然后迅速在冰浴中研磨，开始加入少量 提取介质，最后加至材料体积的一倍。 2. 匀浆用4层纱布过虑，滤液在4℃、1000g离心 10