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广东药学院硕士研究生学位论文 长春花化学成分的分离及分析 摘  要 目的： 通过对长春花（Catharanthus roseus (L.) Don）化学成分的分离及分析研究，以期 达到以下目的：（1）建立长春花中生物碱类成分的薄层分析，初步比较其生物碱类成 分的组成；（2）对长春花中的化学成分进行分离与结构鉴定；（3）建立长春花中文多 灵生物碱等化学成分的 HPLC 含量分析方法； 4）开展长春花 HPLC 指纹图谱的研究， 为长春花药材的整体质量控制提供可靠方法；（5）探讨长春花中文多灵、长春质碱等 生物碱一年内的动态变化规律，及其长春花生物碱的相关性，为长春花 GAP 种植提 供数据支持。 方法： 长春花化学成分的薄层分析与分离： 采用硅胶预制板，以甲醇-氯仿（9:1）为展 开剂，文多灵、长春碱等多种生物碱为对照品，改良碘化铋钾为显色剂，对不同产地 长春花样品进行薄层分析； 以无水乙醇对样品进行反复提取，过滤，合并滤液，并浓缩至流浸膏，采用硅胶 柱色谱层析法，先后以石油醚:丙酮:氯仿（15:5:0.5）系统与甲醇-氯仿（9:1.5）系统进 行洗脱，对其化学成分进行分离。 长春花中文多灵等成分的 HPLC 含量测定：以 yilite C18 柱（10??m, 4.6 mm x 250 mm）为色谱柱，甲醇∶水（64∶36，以二乙胺调 pH11）为流动相；流速为 1ml/min； 检测波长 220nm，建立文多灵的 HPLC 分析方法。 同时，以 yilite C18 柱（10??m, 4.6 mm x 250 mm）为色谱柱，乙腈∶水（90∶10） 为流动相，流速为 1ml/min；检测波长 220nm，建立了熊果酸的 HPLC 测定法。 长春花生物碱类成分的 HPLC 指纹图谱研究：以 yilite C18 柱（10?m, 4.6 mm x 250 mm）为分析柱，甲醇∶水（61∶39，以二乙胺调 pH11）为流动相，检测波长 254nm， 检测时间为 1h 为分析条件，对样品进行了 HPLC 分析，并采用中药指纹图谱相似度 计算软件对不同时间、不同部位以及不同品种长春花色谱图进行相似性分析，对长春 花的质量进行了整体评价。 长春花中文多灵、长春质碱等生物碱类成分的含量动态变化及其积累相关性研 I（ （ 广东药学院硕士研究生学位论文 究： 根据 HPLC 分析的结果，分析了在一年的生长期内文多灵、长春质碱等生物碱 积累的动态变化；同时运用 SPSS 软件初步探讨了长春花生物碱积累的相关性。 结果： 长春花化学成分的薄层分析分析显示，不同产地长春花样品中均含有生物碱，其 中文多灵为主要成分，除香港的长春花外，其他产地中的长春质碱也较为丰富，长春 碱与长春新碱较微弱。 从长春花样品中分离得到了 7 个化合物，并根据理化性质和光谱数据鉴定了其中 的五个化合物，分别为其中 CH-1 为正三十烷,CH-3 为二十五酸二十四烷酯，CH-4 为 1-甲基二十四烷醇，CH-5 为二十八烷醇，CH-12 为熊果酸。 应用建立的 HPLC 分析方法成功测定了不同来源的长春花中文多灵生物碱的含 量，结果表明不同来源的长春花中文多灵含量存在差异。不同产地中文多灵生物碱的 含量最高的为恩平，达 1.848 mg/g；不同品种中文多灵生物碱含量最高的为白花黄心 品种，含量为 0.934 mg/g。 首次建立了长春花中熊果酸的 HPLC 含量测定的方法，测定了长春花不同部位中 熊果酸的含量。其含量分别为：全草 7.416 mg/g，叶 15.427mg/g，茎 6.980 mg/g，花 5.702mg/g。 建立了长春花的 HPLC 指纹图谱，显示有 13 个共有峰，方法学考察符合指纹图 谱技术要求。相似度计算表明，广东不同时期采收长春花的相似度较大，达到 0.9 以 上，不同部位与不同品种间的相似度较小。 长春花中文多灵、长春质碱生物碱类成分含量的动态变化及其积累的相关性分析 表明： 一年的生长时期中，长春花文多灵生物碱的含量差异较大，茎中文多灵的含 量在 10-2 月处于上升阶段，2-9 月总体处于下降阶段。叶中文多灵的含量则在 10-3 月与 4-9 月，分别呈现上升与下降的趋势。与茎、叶相比，花与果中文多灵生物 碱的含量动态变化较为复杂；花中长春质碱在 10-11 月份处于上升，在 11-2 月份下 降，2 月份，含量开始上升，并在 3-9 月处于平缓阶段。叶中长春质碱在 1-4 月份中， 总体呈上升趋势，在四月份达到最大值后急剧下降，在 5-8 月份，其含量又逐渐上升， 在 7-11 月份中，长春质碱含量变化相对较为平缓。果中长春质碱含量主要集中在一 年中的下半年，茎中几乎不含长春质碱。 相关性分析结果表明，文多灵生物碱的含量与长春碱、长