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作者姓名：钱程 论文题目：Fas信号和TLR信号促进调节性树突状细胞负向调控CD4+ T细胞反应及相关机制抗原呈细胞 (antigenpresenting cell, APC)，树突状细胞（dendritic cell, DC）是唯一能活化初始型(na?ve) T 细胞的, 其在诱导T 细胞或耐受的过程中发挥了十分重要的作用。学者们在过去的研究中往往关注免疫细胞的相互作用，而很少研究免疫微环境（包括基质细胞和细胞外基质及多种膜分子和可溶性细胞因子）对免疫细胞的功能以及免疫应答的调控作用。本实验室发现，均终末分化细胞成熟DC与脾基质细胞共培养能够进一步增殖并分化为一类新型调节性树突状细胞，我们将之命名为“分化样树突状细胞”(differentiated dendritic celldiffDC)，从而提出成熟DC并非终末分化细胞完成了抗原递呈任务，次级淋巴器官微环境的作用，功能。diffDC与已经活化的T细胞在胞膜和胞浆内均表达更高水平的Fas，识别不同的病原体LPS、LTA、CpG等微生物一、Fas信号促进调节性树突状细胞diffDC分泌免疫调控因子及相关机制研究 Fas为肿瘤坏死因子受体（TNFR）超家族的成员之一，与配体（FasL）结合后向细胞内传递凋亡信号但是，并非所有表达Fas的细胞在Fas信号启动后都发生凋亡。我们 结果发现，与imDC）和maDC)相比，diffDC能够表达更高水平的Fas，在共培养加入TGF-β中和性抗体能够减弱diffDC上Fas的表达和ERK的活化。 diffDC内ERK的活化程度较高，用ERK抑制剂PD98059抑制diffDC，发现Fas，结果提示来源于ESSC的TGF-β通过增强diffDC内ERK的活化促进了Fas。我们Fas信号是否会影响diffDC独特细胞因子谱的表达和, 结果发现与imDC相比，Jo2能够呈剂量依赖和时间依赖性刺激diffDC分泌更多的IL-10和IP-10IL-10和IP-10。Western blot结果显示，与imDC相比，diffDC在胞浆和核内高表达β-cateninJo2刺激diffDC胞浆内核内β-catenin。为了进一步确证β-catenin在高分泌IL-10和IP-10中的作用，我们培养了正常小鼠和β-catenin缺陷小鼠来源的diffDC结果发现β-catenin缺陷Jo2刺激后IL-10和IP-10的水平结果提示diffDC内β-cateninβ-catenin促进IL-10和IP-10的高分泌。有文献报道ERK可能做为GSK-3β的骨架蛋白，从而维持β-catenin的稳定在Jo2刺激下diffDC内ERK的磷酸化更加ERK抑制剂PD98059预处理Jo2刺激diffDCERK抑制后能够抑制GSK-3和β-catenin的活化IL-10和IP-10。，这些结果Fas信号诱导diffDC高分泌IL-10和IP-10是通过活化ERK/GSK-3/β-catenin信号途径。在免疫反应的动态过程中，DC与周围很多免疫细胞存在相互作用，彼此精密调节，其中最为重要的便是DC和T细胞的相互作用。目前对细胞相互作用的研究主要集中在对T细胞的上而很少关注对DC尤其是调节性DC。由此我们想知道是否表达FasL的活化T细胞也能diffDC的免疫调节功能。我们检测了在不同diffDC/T比例的共培养体系上清的IL-10和IP-10的分泌，结果发现活化T细胞在不同的比例下均能诱导共培养体系IL-10和IP-10。胞内染色流式检测确证IL-10主要来源于diffDC进一步用transwell实验共培养体系IL-10和IP-10细胞直接接触。随后我们使用Fas缺陷FasL缺陷小鼠，结果发现一旦diffDC缺失Fas或活化T细胞缺失FasL，共培养体系中的IL-10和IP-10的产生下降IL-10和IP-10。 在检测Fas信号对diffDC分泌细胞因子的影响的过程中，我们意外地发现diffDC高分泌IL-6刺激能够呈剂量依赖和时间依赖性促进diffDC分泌更多的IL-6。Western blot检测AG490抑制实验发现Jo2刺激促进diffDC的STAT3的。活化T细胞能诱导共培养体系diffDC 在较短的时间内快速高IL-6，FasL/Fas信号。diffDC高表达Fas但Fas信号诱导凋亡来源于ESSC的TGF-β通过活化ERK促进了diffDC表达Fas。 Fas 信号diffDC高分泌IL-10和IP-10可能是通过ERK GSK-3失活上调β-catenin所介导。Fas 信号diffDC高分泌可能是通过ERK活化STAT3高度磷酸化Fas/FasL信号参与diffDC和活化T细胞的相互作用后IL-10和IP-10不参与IL-6的过程。进一步研究表明，