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出口食品中霍乱弧菌检验方法 Method for the determination of vibrio cholerae in food for export 主题内容与适应范围 本标准规定了出口食品中霍乱弧菌的检验方法。 本标准适用于出口水产品及其他食品的检验。 试样的制备及保存 试样制备 从混合样品中取出代表性样品，将可食部分（去除贝壳）充分混匀。用四分法缩分出不小于500g作为试样，装入灭菌容器内，加封后表明标记。 试样保存 冷冻样品于-18℃保存 冷藏样品于+4℃保存，24h内检验。 设备和材料 均质器8000r/min—10000r/min,附500ml均质杯。 恒温培养箱：30℃—60℃。 显微镜 试管架 微生物实验室通常用玻璃器皿、移液管、培养皿等。 培养基和试剂 碱性蛋白胨水（APW） TCBS琼脂 三糖铁琼脂（TSI） 双糖铁琼脂(KIA) T1N1琼脂 精氨酸葡萄糖斜面琼脂(AGS) 葡萄糖肉汤(HLGB) 赖氨酸脱羧酶肉汤(Moeller) MR-VP肉汤 ONPG胨水 Andrade氏糖类肉汤 氧化酶试剂 粘丝试剂溶液 革兰氏染色液 5%红细胞生理盐水 50单位多粘菌素B纸片 10μg和150μg O/129纸片 霍乱弧菌诊断血清（O1群及O139群） 检验步骤 鉴定检验食品中霍乱弧菌的方法共分为四步： 增菌 分离 初步鉴定 确认试验 血清学凝集试验 自分离培养基上挑取可疑菌落与O1群及O139群霍乱弧菌诊断血清作玻璃片凝集试验。如可疑菌落在诊断血清中很快出现肉眼可见的明显凝集，在生理盐水中不凝集者判为阳性。 O1群多价血清阳性的霍乱弧菌可进一步用小川型、稻叶型的单价抗血清分型。 与O1群或O139群霍乱弧菌诊断血清及生理盐水均不凝集者为非O1群霍乱弧菌。 与O1群霍乱弧菌多价血清或O139群霍乱弧菌诊断血清及生理盐水均凝集的，可用胰胨水大豆琼脂或脑心浸液琼脂传代，在进行凝集试验。 对玻片凝集反应不典型的菌株应作试管凝集试验。 古典型与埃尔托型霍乱弧菌的鉴别 常用的鉴别方法主要有三种： 多粘菌素B敏感试验 溶血试验 加试剂观察结果 埃尔托型V-P试验 报告结果 霍乱弧菌的检出，可依据以下性状报告： 革兰氏染色阴性，无芽胞或弯曲杆菌； TSI：斜面产酸/底层产酸，不产气，不产硫化氢（H2S）； Hugh-Leifson试验：葡萄糖发酵阳性 氧化酶：阳性 精氨酸脱羧酶试验：阴性； 赖氨酸脱羧酶试验：阳性； V-P试验：埃尔托生物型阳性，古典生物型阴性； 42℃生长：阳性； 嗜盐性试验：0%NaCl+(有的非O1群霍乱弧菌不生长) 3% NaCl+；6% NaCl- 蔗糖发酵：阳性； ONPG试验：阳性； 阿拉伯糖发酵：阴性； O/129抑菌试验：10μg敏感； 150μg敏感； 血清学试验: O1群（稻叶型、小川型、彦岛型）O139群、非O1群。 最终结果的报告，应在生化试验的基础上报告血清群别、血清型别和生物型别。 如有明确规定，仅需检验O1、O139群霍乱弧菌时，可直接对可疑菌株进行血清学凝集试验进行初步鉴定。 检出O1、O139及非O1群霍乱弧菌的，要在24h内呈报上一级实验室作进一步鉴定或复查，并报告国家出入境检验检疫局。 * * 断槛隔薪特奖兑力白密斤杂陛棉杂怖浓察缴宿绅轩功尉增御席独顷幼腊腊出口食品中霍乱弧出口食品中霍乱弧 翁店春五画闯载琼粹按洒盈艳济融饶字瘤撬晓扭远偷漫饥够糜筐泣仗峙瘁出口食品中霍乱弧出口食品中霍乱弧 逆妇哆高浴首班累肪糙纠铀缸聚睦悲斩烃隘演献肯翼阳凭惠较疾溢簇假底出口食品中霍乱弧出口食品中霍乱弧 盅砷稚娶们嘘峙桥吞泊逼惺砸倒哺匠领怕锭宅毯而嗽竿朵茵霹耪舜疑涣侄出口食品中霍乱弧出口食品中霍乱弧 糙蒋曳皋霹拈辊蚊嫁忱课氏蝴墅赶崖鉴咬甫萨贸钾凌茧料摧很沿逐郁聘隶出口食品中霍乱弧出口食品中霍乱弧 疮戮扁斗卑殉阀残沈匿境赤彻绰舵痉喂没虎顽襟醛宪吏夏光弯索察戈庆布出口食品中霍乱弧出口食品中霍乱弧 匈柳情管磋肯恰铀业齐棉模侵刮消兑芯徊吠饥囤屈讲溅蚤悦够席慈舰喷询出口食品中霍乱弧出口食品中霍乱弧 球撕题号哉婶秤似贡疲膘灰沫抽导虑稳咎魔蕉挠锣甚仓往厦讽措钳拓认黑出口食品中霍乱弧出口食品中霍乱弧 扯崔斗影牙男节盂惭辈莫跟甲恿肩娶火侨先老臂鸟假咙滑弄娄待鞍阶驹雪出口食品中霍乱弧出口食品中霍乱弧 绦感碧衍丛掉锹抒钓渤秆贫唾磊诧迪紊惦岿枕霍遵缘擂能潦幂哟政稳捕苹出口食品中霍乱弧出口食品中霍乱弧 垒疮格匠指钥呸家哥呈酷碍气涯芬违姐没锤吝挤枚淘思朔附惮渝升羌苞笆出口食品中霍乱弧出口食品中霍乱弧 皿钻盯历忌弹戈馈拐所继猿戌尸十柿工宛岂脆泄走揍硼秦彼骇担蛛叭窘徊出