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三 酵母表达系统 （一） 酿酒酵母表达系统 （二） 甲醇酵母表达系统 1、甲醇酵母与甲醇氧化酶启动子 1、甲醇酵母与甲醇氧化酶启动子 1、甲醇酵母与甲醇氧化酶启动子 1、甲醇酵母与甲醇氧化酶启动子 2、甲醇酵母表达系统的优缺点 3、甲醇酵母表达系统操作原理 甲醇酵母系统宿主 甲醇酵母系统宿主 甲醇酵母系统宿主 甲醇酵母系统的整合事件 毕赤酵母系统模式表达载体 1）AOX1位点插入 2）His4位点插入 3） 多基因插入事件（串联整合） 4） 基因取代（GS115，AOX1+） 汉森酵母系统的高拷贝整合型表达载体 甲醇酵母系统胞内表达载体 甲醇酵母系统胞内表达载体 甲醇酵母系统分泌表达载体 甲醇酵母系统分泌表达载体 甲醇酵母系统分泌表达载体 4、甲醇酵母系统高效表达影响因素与对策 1）载体稳定性 2）基因剂量 3）整合位点 5）mRNA5’端 7）分泌信号 表达载体类型 需要带入ATG 单位点 表达载体类型 需要带入ATG 多位点 信号肽：PHO1 信号肽：MFα 信号肽：MFα 标记：Kan 载体稳定性 基因剂量 整合位点 甲醇利用表型 mRNA5’端 AT含量分泌信号 表达产物稳定性 同拷贝数时，整合型的比自主复制型的表达水平高 YRp型载体的稳定化： 选择—非选择培养交替数十代可得稳定的整合子，但费时，整合位点不确定。 采用YIp型载体: 更易实现整合、整