Exp07果蝇唾腺CS制备课稿.pptVIP

实验七 果蝇唾腺染色体的制片与观察 一、实验目的 1.了解唾腺CS的特点 2. 学习分离唾腺的技术 3. 掌握唾腺CS制片方法 二、实验原理 永久间期CS 复制而不分开 多线染色体的特点 巨大,多线 体细胞联会 染色中心 深、浅、疏、密不同的横纹 三、实验材料、器具、药品试剂 黑果蝇(D. virilis)三龄幼虫 解剖镜,显微镜,培养箱;解剖针,镊子, 载片,盖片,吸水纸 0.7％NaCl,1mol/L HCl; 醋酸洋红;培养基 四、实验步骤 1. 三龄幼虫培养 ?营养丰富 ?松软,湿度大 ?追加酵母液 ?幼虫密度 ?15?18℃ 2. 解剖幼虫 肥大幼虫,洗去杂物 剔除脂肪 3. 解离和染色 剥离唾腺置载片中央,加1d HCl,解离1?2? 弃HCl,冲洗2?3次,1-2?/次,最后停10?,吸干 加1d染液,浸染5? 4. 压片及观察 载片置平整处,加盖片,轻敲;用力下压 低倍至高倍镜检 五、注意事项 1. 水不可太多,否则幼虫会漂浮而且活跃 2. 一定加生理盐水,否则唾腺易干 3. 将脂肪组织清除干净 4. 吸水时勿将唾腺一起吸走 5. 染色时间不可过长,否则背景也着色 6. 压片时要揉,用力要均匀 六、作业 1. 制作形态良好、分散适中的临时装片 2. 真实绘制观察到的唾腺CS图像 3. 思考题P66 1-2 * * 伸展状态 压片法 1 d 0.7% NaCl ?一手持解剖针压住虫体后端?处,一手持针扎住头部,适当用力向前拉,唾腺随头部拉出 唾液腺 解剖针 解剖针 唾液腺 头部口器 脂肪带 挑出唾液腺 唾腺 肠道 唾腺与肠道的区别 头 尾 唾腺 注意:剥离过程中,不能让载片上的生理盐水干涸 简要操作步骤 幼虫→清洗→1d盐水→取唾腺→剔除脂肪→解离2?→水洗2-3次→吸干→浸染5?→盖片→覆滤纸→轻敲→压片→镜检 练习取出果蝇幼虫唾腺的技术和制作唾腺CS标本的方法; 了解果蝇唾腺CS的形态学及遗传学特征,并根据唾腺CS上横纹的形态和排列,识别不同的CS; 识别CS结构变异的细胞学表现; 果蝇种间或种内不同品系与近缘种之间的遗传差异常表现为唾腺CS不联会,形成泡、缢痕、间带区的伸缩性以及端粒的形态等多方面的变异,特别重要的是可观察是否产生了倒位、CS的断裂、融合或重排,据此研究其基因序列的差异.因此,无论从细胞遗传学的角度研究基因与突变性状之间的关系,还是从进化遗传学方面研究染色体的系统发育,探讨近缘种间的遗传差异和生殖隔离机制等,唾腺CS的分析研究都是十分重要的.果蝇唾腺CS已广泛用于种内系统发育和种间亲缘关系的研究中 唾腺CS不断地进行自我复制而不分开,经过许多次的复制形成约1000?4000(212= 4096)拷贝的CS丝,合起来达5?m宽,400?m长,比普通中期CS大得多(约100?150倍),又称为多线CS; 由于唾腺细胞在果蝇幼虫期一直处于细胞分裂的间期状态,所以每条核蛋白纤维丝处于伸展状态,因而不同于一般有丝分裂中期高度螺旋化的染色体; 唾腺CS具有许多重要特征,为遗传学研究的许多方面,如CS结构、化学组成、基因差别表达等提供了独特的研究材料 果蝇唾腺CS的特点: 各CS着丝粒附近异染色质区相互结合形成染色很深的染色中心,第Ⅱ、Ⅲ对染色体呈Ｖ形(中着丝粒),各有两臂,Ｘ染色体呈棒状,第Ⅳ对CS呈粒状,观察时可见5条臂由染色中心向外蜿蜒伸展; 横纹有深浅,疏密不同,且各自对应排列,这意味着基因的排列; 复制12次, 一对CS最终可产生212= 4096条染色质丝 0.7% NaCl: 低渗溶液,使细胞膨胀; 黑果蝇(D. virilis, 2n=12) 挑选生长肥大的三龄幼虫放入表面皿中用0.7％生理盐水尽量洗去幼虫体表所沾附的培养基,然后将幼虫置载片上(底部衬上黑色背景),滴1-2滴0.7％生理盐水,找到具有口器的头部(黑点),一手用解剖针扎住(或压住)头部,将虫固定,一手用摄子夹紧幼虫下半部(尾端?处),轻轻向两端拉开,唾腺随头部拉出.唾腺是一对透明的棒状腺体,外有白色的脂肪组织(不透明).去除幼虫其它组织部分,并把唾腺周围的白色脂肪剥离干净 注意: 在整个剥离过程中,不能让载片上的生理盐水干涸,否则唾腺收缩而不易剥离; 冲洗残渣和吸去多余水液时,要避免唾腺被吸水纸吸走 将剥离的唾腺移到载片中央,加一滴1mol HCl于腺体上,解离2?3min,以松软组织,以便压片时细胞分散,CS散开; 稍许去离子水轻轻冲洗2-3次,每次1-2min,最后停留20min,使唾腺细胞充分吸水膨胀,以利CS分散. 图示加入盐酸后的唾腺 染色完成后,以45度角徐徐落下,排净气泡,取少许吸水纸铺在盖片上, 以铅笔橡皮头螺旋形由中间向四周,轻轻敲击盖片,使细胞分散,CS展开; 用左手食指和拇指固定盖片位置,右手拇指使