猪TYR基因外显子1的克隆测序及序列分析.docVIP

猪TYR基因外显子1的克隆测序及序列分析 白小青(,王金勇 （重庆市养猪重点实验室，重庆市养猪科学研究院， 重庆 荣昌 402460） [摘要]本研究对荣昌猪和内江猪的TYR基因外显子1进行了克隆测序及序列分析，结果发现3个新的突变位点：319C→T，537C的插入，551A→G。部分突变序列已被GenBank收录，登录号为 :AY236997。将突变序列翻译成氨基酸序列后发现，319C→T和551A→G是同义突变。537C的插入是移码突变，其是否会对猪的毛色造成影响，还有待进一步研究。 [关键词] 酪氨酸酶基因；序列分析 Cloning , Sequencing and Sequence Analysis of exon1 of Tyrosinase Gene in Pig Bai Xiaoqing Wang Jinyong (Chongqing Swine Science Academy , Rongchang Chongqing , 402460,China) Abstract In the paper,The sequences of exon1 of tyrosinase gene were cloned and analysed in Rongchang pig and Neijiang pig. As a result, three new point mutations( 319C→T，The insertion of 537C，551A→G) were observed. Part mutated sequence was recepted by GenBank and the accessin number was AY236997. The DNA sequences were translated into amino acid sequences and the result showed the displace mutations (319C→T and 551A→G) beloned synonymous mutations and the insertion mutation was frame mutation. Wether the insertion mutation affect coat color or not ,which needed to be deeply studied. Key words tyrosinase gene ; sequence analysis 引言 猪的各种毛色表型是由黑色素在毛皮质和髓质中沉积的种类和数量的不同造成的。黑色素有2种：真黑色素和褐黑色素[1]。2种黑色素的形成均与酪氨酸的氧化有关，而酪氨酸酶是酪氨酸氧化过程中的关键酶[2]。酪氨酸酶是一种含铜的金属糖蛋白,其主要功能是在黑色素生物合成中催化三步反应：酪氨酸羟化成Ｌ-3,4-二羟苯丙氨酸(多巴),多巴氧化成多巴醌,5，6-二羟基吲哚氧化成吲哚-5,6-醌 [3-5]。黑色素实质是多巴醌、吲哚-5,6醌、多巴色素的聚合物[6]。 酪氨酸酶由白化位点的酪氨酸酶基因编码,后者发生功能性突变，可导致白化,这已在人[7]、牛[8]、猕猴[9,10]等物种上得到证明。而且，其序列变异与白化病、毛色、肤色的相关性研究已成为一个热点。在猪上，尽管有少量的研究报道[11-13]，但是相对其他物种研究滞后。本研究对荣昌猪和内江猪的TYR基因外显子1进行了克隆测序及序列分析，旨在寻找新的突变，为与该基因相关的研究奠定基础。 1 材料与方法 1.1 实验动物 纯白荣昌猪2头，大黑头荣昌猪1头，采自重庆市养猪科学研究院猪场。内江猪1头，采自四川省内江市资中县陈家沟乡农户。 1.2 猪耳组织DNA的提取 常规酚仿抽提。 1.3引物合成 本研究以序列（GenBank:AF181962,AF181963）为参考，采用Giuffra 等（2000）设计的引物用于纯白荣昌猪和大黑头荣昌猪TYR基因外显子1的扩增。引物序列为：1F ：GCTGGAAAGAGAAGTGTG 1R： GCC