猪致病性大肠杆菌的分离鉴定及药敏试验.docVIP

四川农业大学本科生毕业论文（设计）开题报告 毕业论文（设计）题目 猪致病性大肠杆菌分离鉴定及药敏试验 选题类型 基础型 课题来源 自选项目 学 院 动物医学院 专 业 生物工程 指导教师 杨泽晓 职 称 副教授 姓 名 赵耀 年 级 2011 学 号 开题报告（立题依据、研究的主要内容及预期目标、研究方案、论文进度安排、主要参考文献） 1.立题依据 大肠杆菌是人及动物肠道的正常寄居菌，构成肠道正常菌群的主要部分，并具有重要的生理作用。人和动物出生后数小时大肠杆菌即可经口进入消化道后段，大量繁殖、定居，终生伴随，并经粪便不断散播到周围环境。大肠杆菌在人和动物的肠道内，大多数在正常条件下是不致病的共栖菌，少数与人和动物的大肠杆菌病密切相关，根据致病作用可将大肠杆菌分为五大群，即肠道产肠毒素性大肠杆菌(ETEC)、产类志贺毒素大肠杆菌(SLTEC)，败血性大肠杆菌(SEPEC)，肠道致病性大肠杆菌(EPEC)和尿道致病性大肠杆菌(UPEC)。其中ETEC 在猪的病原学上有极为重要的意义, 在仔猪腹泻病病原中, 约有40% 的病例由ETEC 引起, 而在我国则约为35%[1]，当机体免疫力下降或菌体侵入肠外组织时，能引起严重腹泻和败血症，甚至造成死亡，对于新生仔猪，能引起仔猪黄、白痢和成年猪水肿病，且发病率和死亡率均较高，是一类重要的人畜共患病。仔猪腹泻是兽医临床上的多发病、常见病，是引起仔猪死亡的主要原因之一[2]。 大肠杆菌为需氧或兼性厌氧菌，最适生长温度为37℃，最适生长pH为7．2-7．4，对营养要求不高，在普通培养基或人工合成培养基上均能良好生长，大肠杆菌能发酵多种碳水化合物产酸产气，如可迅速分解葡萄糖、乳糖等多种碳酸化合物，约半数菌株不分解蔗糖。还原硝酸盐，产生靛基质，几乎不产生硫化氢，不分解尿素。除乳糖发酵试验外，吲哚形成试验、甲基红反应、VP试验和枸橼酸盐利用等4项试验(IMVIC试验)是卫生细菌学中常用的检钡0指标。吲哚和甲基红试验均为阳性，VP试验和枸橼酸盐利用试验均为阴性，即IMVIC为“++--”。大肠杆菌的抵抗力中等，各菌株间可能有差异。常用消毒药在数分钟内即可杀死本菌。在潮湿，阴暗而温暖的外界环境中，本菌的存活不超过1个月，在寒冷而干燥的环境中存活较久。各地分离的大肠杆菌菌株对抗药物的敏感性差异较大，且易产生耐药性[3]。猪大肠杆菌病是由病源性大肠埃希氏菌引起猪的传染性疾病的总称。由于病源性大肠杆菌的血清型不同和猪的年龄、生理机能和免疫状态等差异，猪大肠杆菌病主要表现为肠炎、肠毒血症、水肿等多种临床症状，其中仔猪引起的常见疾病可分为仔猪黄痢、仔猪白痢和猪水肿病三种。猪大肠杆菌病在世界各地均存在，仔猪黄、白痢为猪场中最常见的传染病，其发病率、死亡率均居仔猪疫病之首，给养猪业带来极大危害和经济损失。大肠杆菌病发生后多采用抗生素类药物进行治疗，使得大肠杆菌病得到一定的控制。但是，由于抗生素的广泛及不合理使用，细菌耐药性日益严重，特别是多重耐药性问题更加突出。此外，为预防该病，国内外虽然研制了各种类型的基因工程菌苗与多价灭活菌苗，但由于大肠杆菌的血清型复杂，各个地方的流行菌株各不相同，免疫效果并不理想，一般以自制的灭活菌苗效果更好。由于本病发生的原因很多，常表现为多种因素相互作用的结果，有时呈交叉感染，导致临床防治困难，引起仔猪大量死亡，给养猪业带来巨大的经济损失。因此，如何采取有效的措施预防和控制规模化猪场大肠杆菌病已成为养猪业生产的一项重要课题[4]。在防治猪大肠杆菌病的同时, 要注意细菌的耐药性主要是由质粒决定的。由于各耐药质粒基因不同, 而导致不同的耐药性。一旦发生仔猪黄、白痢, 应分离细菌并进行药敏试验,筛选出最佳抗菌药物, 切忌盲目给药[5]。一些大型集约化养殖场，饲养密度过大，通风换气不良，卫生和消毒不彻底，是加速本病流行的不容忽视的主要因素[6]。 为了熟悉并掌握微生物诊断、分离、纯化、培养等相关技术，我们就一雅安某猪场送检的猪内脏病料进行大肠杆菌的分离鉴定，期望为大肠杆菌感染相关疾病的防治提供一定的参考依据。 2.研究的主要内容及预期目标 本次实验研究的主要内容是对仔猪病变器官进行致病性大肠杆菌的分离，并进行鉴定、纯化、培养、生化鉴定、药敏实验和小鼠致病性实验。 预期目标分离纯化致病性大肠杆菌1株，进行生化鉴定、药敏试验和致病鉴定。 3.研究方案 3.1试验材料 3.1.1病料： 雅安某猪场患病仔猪内脏器官 3.1.2培养基： （1）麦康凯琼脂培养基 蛋白胨17g 脙胨 3g? 猪胆盐(或牛、羊胆盐)5g? 氯化钠 5g? 琼脂17g? 蒸馏水1000mL? 乳糖10g? 0.01%结晶紫