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注： 1、论文的中文摘要、正文、参考文献、附录、致谢等均采用宋体；英文Times New Roman”字体； 2、除表格内容、表注、图注外，均采用小四号字； 3、中英文摘要、正文和附录的行距：1.5倍； 4、图、表：居中，并且前后均要空一行；图注和表头居中；表内文字用5号字（特殊情况用更小号字）。 5、物种要全称并加学名。如中华蜜蜂(Apis cerana cerana) 6、当外文插在中文中间时外文的前和后都要空1格，如本文中“现的Ascosphaera 属孢囊真菌 （空一行） 摘要：Ascosphaera 属真菌是影响蜂类幼虫成活率的主要疾病——白垩病的病原物。本研究根据 GenBank 收录的 Ascosphaera 属中20个种的核糖体DNA（rDNA）的内部转录间隔区ITS1和ITS2及5.8S（ITS1-5.8S-ITS2）区段序列资料，分别设计 Ascosphaera 属的和种的高特异性引物，构建一套以PCR为基础的 Ascosphaera 属和种的快速、可靠的鉴定方法，并对本实验室保存的9个不同来源的菌株进行鉴定。结果表明，Ascosphaera 属和A. apis 种特异引物可以扩增出稳定特异条带，A. aggragata 种特异引物还需要进一步优化。 （空一行） 关键词：白垩病 球囊菌 特异性引物 PCR鉴定 （空二行） Abstract: Fungi in the genus Ascosphaera are the causative agents of chalkbrood, a major disease affecting bee larval viability. The genus-specific primers for Ascosphaera, and species-specific primers for species were designed from the sequences of the internal transcribed spacers, ITS1 and ITS2, and 5.8S region (ITS1-5.8S-ITS2) of ribosomal DNA (rDNA) in GenBank from 20 species of Ascosphaera. We developed a rapid and reliable PCR method for identifying species of Ascosphaera. The results showed that Ascosphaera genus-specific primers and A. apis species-specific primers successfully amplified a specific product, A. aggragata species-specific primers need to be optimized. Key words: chalk-brood disease; Ascosphaera; specific primers; PCR identification 1 引言 1.1 蜜蜂白垩病的发生现状（参考文献出处标注例一） 白垩病（Chalkbrood）又名石灰子病、石灰质病等，是当前养蜂生产上危害严重的一种顽固性真菌传染病[1]。蜜蜂白垩病是蜜蜂球囊菌（Ascosphaera apis）引起的，该病最早是1913Massen在德国发现的[2]，其后该病很快蔓延至许多国家[1, 3-5]。1968年以前主要发现在欧洲各国，但到1970年以后迅速传播至美国、加拿大、日本等地[4, 6]。白垩病（Chalkbrood）又名石灰子病、石灰质病等，是当前养蜂生产上危害严重的一种顽固性真菌传染病。蜜蜂白垩病是蜜蜂球囊菌（Ascosphaera apis）引起的，该病最早是1913Massen在德国发现的，其后该病很快蔓延至许多国家。1968年以前主要发现在欧洲各国，但到1970年以后迅速传播至美国、加拿大、日本等地。1.2 蜜蜂白垩病发生症状 蜜蜂白垩拖出巢地面可看见石灰块状尸体[3]。…… 1.5 蜜蜂白垩病的防治 蜜蜂白垩病的防治各学者提出不同方法，…… 1.5.1 预防措施 从大量观察的情况表明，凡是巢内饲料不足的蜂群、…… 1.6 球囊菌属中种的鉴定研究进展 目前自然界中所发现的Ascosphaera 属孢囊真菌有22种[14-15]，都与 Apoidea 总科的社的腐生物[16]。 2 材料与方法 2.1 材料 2.1.1 菌株 ……3 结果与分