DNA的三级结构专用课件.pptVIP

（三）DNA的三级结构 （四）真核细胞染色体DNA结构 五、RNA的结构 七、核酸的性质和最常用的研究方法 八、核酸的生物功能 用1～2个已知浮力密度的标准DNA样品作参考 式中 ρ：未知DNA的密度 ρ0：标准DNA的密度 ω：角速度（弧度/秒） r： 未知DNA与转轴之间的距离 r0：已知DNA与转轴之间的距离 2．DNA中G-C含量的测定 G-C对的含量与浮力密度之间呈正比关系 Rolfe-Meselson导出了如下公式： ρ=0.100（G-C%）+1.658(g/cm3) 知道了浮力密度就可计算出G-C对的含量 3．核酸的构象和分离 ρ：RNA环状DNA线状DNA蛋白质 DNA 沉降 （六）核酸的变性、复性和杂交 1．变性（denaturation） 核酸变性的概念 引起核酸变性的因素 （1）热变性 结构：螺旋→线团 理化性质：紫外吸收↑ 粘度↓比旋光度↓ 生物活性：生物活性↓或丧失 （2）熔点（Tm） Tm: 熔点，熔解温度， 变性温度，解链温度 （3）影响Tm值的因素 ① DNA的均一性 ② DNA中G-C对的含量 经验式: (G-C)%=(Tm-69.3)×2.44 ③ 盐离子强度 2．复性（renaturation） （1）复性 理化性质: ↓ 比旋光度↑ 粘度↑ 高于Tm值5℃ 复性 也称退火 （annealing） 生物活性得到部分恢复 （2）影响复性的因素 ① 样品的性质 ② DNA的浓度 ③ DNA片段的大小 ④ 温度 ⑤ 离子强度 （3）复性动力学 DNA的复性过程是一种双分子反应 S：single strand DNA D：double strand DNA 经重排，积分等 式中 C0：t=0时，起始DNA的浓度（mol/L） C：t时间时，单链DNA的浓度（mol/L） k：复性反应常数（L/mol·sec） t：复性时间（sec） C C0 = 1 1+kC0t Cot : 时的Cot值，即指复性完成一半时的Cot值。 3．杂交（hybridization） 核酸的杂交：是指不同来源的单链核酸之间可通过 碱基互补形成双螺旋结构。 单链DNA与单链DNA杂交（DNA-DNA） 利用核酸杂交可检测特定的核苷酸片段或研究同源性等。 单链DNA与单链RNA杂交（DNA-RNA） 单链RNA与单链RNA杂交（RNA-RNA） X光晶体衍射解出的 tRNA 立体结构 1980年牛心线粒体tRNAser只有63个核苷酸，沉降常数3S，缺少D环和D臂，呈二叶草型。 近年来发现2种线虫线粒体tRNA也不是标准的三叶草结构。 2．rRNA的二级结构 3．mRNA的二级结构 The secondary structure of HEC-SOD’s mRNA. the free energy of result is –587.9J. （四）RNA的三级结构 tRNA的三级结构 六、核酸酶类 包括核酸水解酶、合成酶、连接酶等。 （一）核酸水解酶的分类 1．底物：核糖核酸酶（ribonuclease, RNase） 脱氧核糖核酸酶（deoxyribonuclease, DNase） 2．作用方式：核酸内切酶（endonuclease） 3．按磷酸二酯键断裂的方式 4．其它：如双链酶、单链酶等 核酸外切酶（exonuclease） （二）核糖核酸酶类 1．牛胰核糖核酸酶（pancreatic ribonuclease, 简称RNase A或RNase I） 2．核糖核酸酶T1（ribonuclease T1，简称RNase T1） 3．核糖核酸酶T2（ribonuclease T2，简称RNase T2） 主要作用点为Ap残基，水解速度AUGC A U C G A G （三）脱氧核糖核酸酶 1．牛胰脱氧核糖核酸酶 （pancreatic deoxyribonuclease简称DNase I） 2．牛脾脱氧核糖核酸酶 （spleen deoxyribonuclease, 简称DNase II） 3．限制性内切酶（restriction endonuclease） 简称限制酶 限制性内切酶主要降解外源的未经特殊修饰的DNA，对自身起了保护作用。 发现概况: （