细胞的凝集反应实验报告.docVIP

细胞生物学实验报告 细胞的凝集反应 实验目的： 了解细胞膜的表面结构 掌握凝集素促使细胞凝集的原理 实验用品： 仪器及器材：离心机、显微镜、镊子、注射器、离心管、滴管、双凹载玻片等 实验药品：PBS缓冲液、抗凝剂、生理盐水 实验材料： 兔血、土豆去皮块茎 实验原理： 细胞质膜是由蛋白质不同程度镶嵌在脂双层中所形成的动态流动结构，蛋白质和脂类分子又与寡糖链结合为糖蛋白和糖脂分子，糖蛋白和糖脂分子伸至细胞表面的分枝状寡糖链在质膜表面形成细胞外被（又称为糖萼）。许多研究结果表明：细胞间的分子识别、细胞的生长和分化、免疫反应和肿瘤发生等均与细胞外被（分枝状寡糖链）有关。 凝集素是一类可逆结合特异糖基的含糖蛋白质（少数例外），能与细胞外被的寡糖链相连接，使细胞发生凝集。 凝集素使细胞凝集是由于它与细胞表面的糖分子连接，在细胞间形成桥的结果。加入与凝集素互补的糖分子可以抑制细胞间的凝集反应。mL PBS缓冲液中。浸泡2小时后，浸出的粗提取液中即含土豆凝集素。 在兔的耳缘静脉处抽取兔血2mL（加抗凝剂），再加入生理盐水3mL，放入离心机中。 离心 把离心管放入离心机，以1000r/s离心5分钟。 重复上述操作一次 按沉淀压积的红细胞体积用生理盐水配成2％红细胞悬液 在双凹载玻片的左孔加入土豆凝集素和2%的红细胞悬液各1滴；在右孔内加入PBS缓冲液和2%的红细胞悬液各1滴。用手摇晃载玻片，观察现象。 实验结果： 刚开始摇晃时，双凹载玻片左侧细胞出现凝集现象，呈沙粒状，而细胞没有凝集。 双凹载玻片上两种细胞对比 显微镜下左侧细胞出现沙粒状的凝集现象 继续摇晃，双凹载玻片左侧细胞凝集现象更加明显，红细胞聚成小颗粒；右侧细胞仍没有发生凝集现象。 双凹载玻片上两种细胞的对比 显微镜下左侧细胞出现颗粒状的凝集现象 分析与讨论 结果分析：双凹片右侧细胞其对照作用，它没有发生凝集，说明血浆中的物质不能使细胞发生凝集；而双凹片左侧的细胞发生凝集，说明使细胞发生凝集的是土豆凝集素。 注意事项 本次实验前应了解，本次实验只能用10倍物镜观察，用40倍物镜可能会弄脏镜头。 实验前，可用手摸双凹片，以确认正反面。 实验时，摇晃双凹片时，应注意手法。不可使液体摇出凹陷处。 摇晃过程中可能出现PBS缓冲液一端的血细胞集中至中央。这并不是因为此处的血细胞发生凝集，而是摇晃手法的问题。 在实验进行一段时间之后，要随时在双凹片的两端滴加PBS缓冲溶液，以免实验过程中双凹片凹陷处水分蒸发，观察不到实验现象。