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细胞培养的扩张时代[导读]?多亏了生物技术工业的成就，细胞培养的纵向扩展已经是一条康庄大道。“这个领域已经迸发出来，因为大量的产品层出不穷，在非常大的生物反应器中，药物能够在哺乳动物细胞中大批量的生产出来.??? 传统的实验室生物学是一种小规模操作；组织培养器皿很少会大于实验者的手掌，容量度量以“毫升”为单位，蛋白纯化能够产出几微克就算大功告成。随着人们越来越关注转化研究、结构生物学和再生医学，很多科学家开始从“大”处着眼。无论是试着纯化几克蛋白进行结晶实验，还是测试全新基因产物发展成新药的可行性，这些研究者很快就会发现自己开始思索复杂的大规模细胞培养。???? 多亏了生物技术工业的成就，细胞培养的纵向扩展已经是一条康庄大道。“这个领域已经迸发出来，因为大量的产品层出不穷，在非常大的生物反应器中，药物能够在哺乳动物细胞中大批量的生产出来。”位于美国马里兰州贝塞斯达市的国家糖尿病、消化与肾病研究所生物技术核心实验室主任 Joseph Shiloach 补充道，取决于细胞类型，必需的设备和试剂通常有现货供应。??? 检视悬浮培养??? 对很多科学家来说，大批量的细胞生长最显见的选择是采用他们早已熟知的技术：悬浮培养。大量的细胞系已经能够适应小旋转瓶的生长环境，因此最初的规模扩大就只是买个更大的旋转瓶。悬浮培养也为研究者进一步扩展提供了多种选择。??? 在摇瓶中进行培养尤为灵活，研究者可以通过在单个平台上逐步扩大尺寸来加快速度。“你可以弄一个小尺寸的平台（摇床）放在恒温箱中，而且……可以从只有几毫升培养物的试管开始，然后一直扩大到在大的培养瓶中培养数升的培养物。”位于加州卡尔斯巴德的生命技术公司细胞生物学高级产品经理 Henry Chiou 表示。??? 必要时，适用于摇床或者旋转瓶的悬浮培养法通常很容易扩展到更大的尺寸。“你可以尝试不同类型的摇瓶和旋转瓶去满足最开始工作时所需的体积，而如果你需要再增加一点点体积，就可以采用小型的生物反应器。” Shiloach 说。??? 生物制药行业例行采用在生物反应器中的悬浮细胞培养来制造临床获准产品，因此供货商制造出的系统规格从台式到工业规模的都有。如今，这样的生物反应器很多都使用了一次性的培养室以避免灭菌的困难。“整个生物反应器都是一次性的，所以购买时一切所需都已经装配好了，你只需要加入培养基。” Shiloach 说。他接着说，“你可以在初期操作时使用小一点的发酵罐，非常类似于摇瓶，你可以将其拿进通风厨，你可以将其进行接种……，而后你可以把它放起来并连接到系统中。”??? 一开始从小规模到大一些规模的旋转瓶或摇瓶培养，甚至到小型生物反应器都看起来挺简单的，但随着规模增长，就会突然出现新的问题。大型生物反应器通常需要更复杂的硬件支撑，并需要为维持pH值和养分水平进行更细致而频繁的测试，研究者可能需要额外的操作培训。“一旦你开始规模扩大并需要特定的产量，这个产量就会特别依赖于细胞的健康程度。” Chiou 补充道，“仔细地监控你的培养变得尤为重要。”??? 一些供货商提供了略微不同的旋转瓶、悬浮培养瓶和生物反应器，通常是为解决具体问题做出的全新改动。举例来说，位于纽约州华盛顿港的颇尔生命科学公司目前正在销售一种台式的生物反应器，能够搅动装满细胞和培养基的一次性塑料袋。这个袋子放置在一个特殊的摇床顶上，通过两个单独的轴线来回摆动。低剪切力与一次性培养室的结合有助于维持从一批细胞到下一批细胞的一致性。位于美国新泽西州皮斯卡塔韦市的通用电气医疗集团生命科学部使用的方式类似于其WAVE生物反应器，这一反应器的特色也是在摆动的平台上的一次性袋状生长室，尺寸大小从 100 毫升到 500 升不等。??? 鉴于各方面的选择，科学家需要花些时间去考虑哪种方式是最有效的。特别是对于需要保持溶解氧和pH值等参数时， Shiloach 建议询问支持设备并检测每个系统之所需。如果一个系统看上去很适合， Shiloach 说，“我认为最好的方法是搞一台试试。”??? 宁“转”勿战??? 当选择的细胞无法在悬浮状态下生长，一些研究者需要寻找其他方法来扩大规模，亦或不必如此。很多情况下，最明智的选择还是转向悬浮培养。“如果你有一个产物需要检测，而且你只需要几毫克来检测它的生物活性是否是你想要的，你可以从贴壁（细胞）开始做起，但如果产物看起来不错，我想最好还是试着改变这些细胞，或是试试另一个细胞系……然后就使用悬浮培养。” Shiloach 说。??? 如果目标是临床治疗，那么转变细胞系也可能会帮助加速监管部门的审批过程。像中国仓鼠卵巢（CHO）和人类胚胎肾细胞 293（HEK-293）等已建立起来的悬浮培养系统形成了目前生物制药生产的支柱，因此监管部门已经对此颇为习惯。??? 转向适应悬浮的细胞系是扩大蛋白产量的绝佳策略