胸部肿瘤患者血清蛋白组学检测的临床应用.docVIP

胸部肿瘤患者血清蛋白组学检测的临床应用 　　作者：郑慧禹,综述,戴天阳△,审校　　作者单位：泸州医学院附属医院心胸外科，四川 泸州 646000 　　【摘要】随着蛋白组学技术和生物信息技术的飞速发展，蛋白质芯片表面增强激光解吸电离飞行时间质谱(SELDITOFMS)技术应运而生，它为恶性肿瘤的早期诊断构造了一个新的技术平台，具有高通量、高效率、高灵敏度、低创伤等特点，可以快速准确地分析标本中的蛋白质组成，在基础医学研究、临床疾病诊断以及药物研发方面显示出广阔的应用前景及临床意义。本文就其技术原理和在胸部恶性肿瘤的早期诊断中的应用及发展前景做一综述。 　　【关键词】 胸部肿瘤,蛋白组学,SELDI TOF MS ,早期诊断 　　蛋白组学是对动态流动因子组合的研究，当健康细胞向肿瘤细胞转化时，就有蛋白质表达、修饰、种类、及表达部位的变化，从而影响细胞的功能，蛋白组学技术就是要准确的监测疾病过程中蛋白质的变化，探讨其变化是肿瘤蛋白组学研究的重要问题。目前国内外已有不少学者应用表面增强激光解析/电离飞行时间质谱仪(surface-enhanced laser desorption/ionization timeofflight mass spectra，SELDITOFMS)技术从血清中筛选卵巢癌[1]、前列腺癌[2]、胃癌[3]等肿瘤特异性标志物，并1建立起相应的诊断模型，如：人工神经网络模型、判别分析模型等，其检测的灵敏度和特异性均能达到80%～100%，对于胸部肿瘤蛋白组学也有一定的研究，现就胸部肿瘤患者血清特异蛋白的表达检测综述如下。 　　1 SELDITOFMS的检测原理 　　SELDITOFMS作为一种带电粒子的质量鉴定方法，它的工作原理是采用化学或生物学的方法在蛋白芯片载体表面制作点状芯池，每个芯池用探针修饰，形成化学表面芯片探针或生物表面芯片探针。使用时先将需要检测的含有蛋白质的标本，如血清、尿液、脑脊液等按一定程序前期处理，然后在每个芯池内加入待测样品，样品中的蛋白与特定的探针结合后，在原位洗去非特异性结合及未结合的物质，再加入能量吸收剂，保留在芯片上的蛋白与能量吸收剂形成混合结晶，即可直接进行质谱检测。质谱检测的原理是芯池中的分析物经激光脉冲辐射解析形成电荷离子，不同质荷比(M/Z)离子在仪器场中飞行的时间长短不同，质量越轻，相对所带电荷越多，其质荷比也就越小，飞行时间越短，检测器即可将其最先检测到，信号由高速的模拟数字转化器转化并记录，被测定的蛋白质以一系列峰的形式呈现，这些特异的峰可看成此类疾病的蛋白指纹。SELDITOFMS分析的蛋白峰的质谱图的横轴表示蛋白质类型，纵轴代表蛋白质的强度和丰度，进行定量测定。整个技术流程包括蛋白芯片载体的选择、探针的选择及固定、待测样品的前处理、芯片检测、计算机处理和结果分析等步骤。利用SELDITOFMS可发现过去无法分离检测的新的疾病蛋白质谱图，可以将患者血清中蛋白质成分的变化记录下来，绘制成蛋白质谱图，并显示样品中各种蛋白的分子量、含量等信息，从而鉴别癌症患者和非癌症患者的血清蛋白质组图谱。 　　2 胸部肿瘤血清检测的研究 　　2.1 食管癌的研究 随着蛋白质组学实验技术(蛋自质芯片技术，蛋白双向凝胶电泳技术)和计算机生物信息处理技术的迅速发展，Yasuharu Hayashida et al[4]利用SELDITOFMS对27例样本血清进行研究(实验组为15例治疗前病理学诊断为食管癌患者，对照组为12例正常人群)，以向量计算法构建蛋白质图谱诊断模型，将诊断模型对实验组以盲算法进行独立检测，发现共有859个蛋白质峰，其中一组高表达有4个质峰，M/Z分别为7420、9112、17123和12867，通过向量计算法能区分实验组和对照组，这组质峰对实验组进行验证，有93.3%(14/15)的食管癌患者被正确诊断。Wang LD et al[5]利用SELDITOFMS和WCX2对130例样本血清进行检测(包括63例具有正常食管上皮组织，40例具有食管基底细胞增生，27例食管上皮细胞发育不良，30例食管癌患者)，发现食管基底细胞增生组有一个有效蛋白峰值，质荷比(M/Z)为9306.61u;食管上皮细胞发育不良组有一个有效蛋白峰值，M/Z为13765.9u;食管癌组有两个有效蛋白峰值，M/Z分别为2942.15u和15953.4u。分别以此建立3个决策树诊断模型，在训练组对三种类型诊断的敏感度分别为57.5%(23/40)、88.8%(24/27)、96.6%(29/30)，在测试组对三种类型的敏感度分别为57.5%(23/40)、66.6%(18/27)、60.0%(18/30);在