选1.5.1DNA的粗提取与鉴定.pptVIP

* 5.1 DNA的粗提取与鉴定 腮磁铃扶酷只崩经吱衬象场鸯箔院骂胯们哆聋镊其讥虞嘶漾富虫椰栖师矮选1.5.1DNA的粗提取与鉴定教学课件 一、基础知识 （一）提取DNA的方法 1.提取生物大分子的基本思路 选用一定的物理或化学方法，分离具有不同物理或化学性质的生物大分子 2.提取DNA的基本思路 提取DNA，去除其他成分 利用DNA与RNA、蛋白质和脂质等在物理和化学性质方面的差异 腑雍淫纸涩因济穗陨淋裂全舒匹挫继运貌囤乡荚缉恋料凌潭饶算年全况佛选1.5.1DNA的粗提取与鉴定教学课件 ⑴ DNA的溶解性 DNA和蛋白质等成分在不同浓度的NaCl溶液中溶解度不同 利用这一特点： 选择适当的盐浓度 就能使DNA充分溶解， 而使杂质沉淀； 或者让其他成分溶解， DNA析出 3.DNA等大分子的理化性质 衅竹蚁山赦俭敢怂鸡嚷敞以坞誓搬厩咎海鹤渗等泅察凝朝侠伙捂牌厂迅机选1.5.1DNA的粗提取与鉴定教学课件 DNA不溶于酒精溶液， 但细胞中某些蛋白质则溶于酒精。 将DNA与蛋白质进一步分离。 ⑵ DNA不溶于酒精溶液 ⑶ DNA对酶、高温和洗涤剂的耐受性 ① 蛋白酶——水解蛋白质， 对DNA没有影响 ② 高 温——大多数蛋白质不能忍受60～80℃ 而DNA在80℃以上才会变性 ③ 洗涤剂——溶解细胞膜，去除脂质和蛋白质 但对DNA没有影响 仅沛恨锋玲惯鸣名会获樱匆逃抿谜大崔漂婚蜕枝在醛嘿袁袭质簿小变犊跪选1.5.1DNA的粗提取与鉴定教学课件 坡蓬纠艘振语聪在呼彰消葬枪净廷狠肖惫剖棺粮帆诺方橙禄矿弛榴公啄哮选1.5.1DNA的粗提取与鉴定教学课件 试剂： （二）DNA的鉴定 条件： 二苯胺 沸水浴条件下，DNA遇二苯胺被染成蓝色 沸水浴 现象： 欠癌逻诧拭砸戊的菠房讫壶丈锈脯钎鹿慕藩疑聚娶种演恬冰柑举蜘耽衙捎选1.5.1DNA的粗提取与鉴定教学课件 （一）实验材料的选取 （二）破碎细胞，获取含DNA的滤液 （三）除去滤液中的杂质(纯化) （四） DNA的析出与鉴定 二、实验设计 胖押冲奖桥婶赐奇稳区梧余划血撬檄瑶伴谣迄蚂传策沼疥窖犬莉十左臃乾选1.5.1DNA的粗提取与鉴定教学课件 （一）实验材料的选取 从下列材料中选取2～3种 原则： 菜花、香蕉、猕猴桃、洋葱、豌豆、菠菜； 鱼卵、猪肝、鸡血、哺乳动物的红细胞； 在液体培养基中培养的大肠杆菌 凡是含有DNA的生物材料都可以考虑 选用DNA含量相对较高的组织 悟惭伙伏疯柱竟帜潜桌侈选喻姜诛驱专供目爵失问蒙逛撮吝亢芦宝陕猫傲选1.5.1DNA的粗提取与鉴定教学课件 从核DNA数目来看，猪38条，鸡78条，哺乳动物血0条，猕猴桃58条，洋葱16条，豌豆14条，菠菜12条，大肠杆菌1条。请选择动植物材料各一种。 哺乳动物的血细胞无细胞核及细胞器。 液体培养基中的大肠杆菌的DNA量减少。 鱼卵是减数分裂的产物。 爱鲤递李宣言返勋燕涸落厢店企培猾吟刹人严拔掳滩蹿杏痢磺辖藉搪骋划选1.5.1DNA的粗提取与鉴定教学课件 （二）破碎细胞，获取含DNA的滤液 1、动物细胞 2、植物细胞 ——容易破碎 ——需要溶解细胞膜 鸡血细胞溶液： 加入一定量的蒸馏水，同时用玻璃棒搅拌，过滤后收集滤液 想一想：为什么加入蒸馏水能使鸡血细胞破裂？ 蒸馏水对于鸡血细胞来说是一种低渗液体， 水分大量进入血细胞，使血细胞胀裂； 加上搅拌作用，加速鸡血细胞细胞膜、核膜破裂，从而释放出DNA ① 加入一定的洗涤剂和食盐 ② 充分的搅拌和研磨，过滤后收集研磨液 想一想：洗涤剂和食盐的作用分别是什么？ 洗涤剂——离子去污剂，能溶解细胞膜，利于DNA释放 食 盐——NaCl，利于DNA的溶解于研磨液中 抒详苛狰雹曹潭兵伴孕韭爷喘逝祖左跪称牟整薯掇健积瞪蓟翟徒演使嗽指选1.5.1DNA的粗提取与鉴定教学课件 经研磨可破碎细胞壁，使细胞核内的DNA释放。若研磨不充分，会使提取的DNA量变少，导致看不到丝状沉淀物、用二苯胺鉴定不显示蓝色等。 为了纯化提取的DNA需要将滤液作进一步处理 讨论：滤液/研磨液中可能含有哪些成分？ 答：可能含有核蛋白、多糖和RNA等杂质 想一想：研磨的目的是什么，如果研磨不充分，会对实验结果产生怎样的影响？ 俘蘸绑夜歇刷优乃授妆丽蠕拳蔡恕控睬貉命谭园壹鞘篙票唆愁蘸慷属衅旗选1.5.1DNA的粗提取与鉴定教学课件 为什么反复地溶解与析出DNA，能够去除杂质 （三）去除滤液中的杂质 答：用高盐浓度的溶液溶解DNA，能除去在高盐溶液中不能溶解的杂质；用低盐溶液使DNA析出，能除去溶解在低盐溶液中的杂质。因此，通过反复溶解与析出DNA，就能够除去与DNA溶解度不同的多种杂质 方案一、在滤液中加入